Thermo Scientific™ Maxima H Minus First Strand cDNA-Synthese-Kit

Beschreibung

Beim Maxima H Minus Erststrang-cDNA-Synthese-Kit† handelt es sich um ein Komplettsystem für die hocheffiziente Synthese von Erststrang-cDNA. Im Kit ist Maxima H Minus Reverse Transkriptase (RT) enthalten – ein leistungsstarkes Enzym, das durch In-vitro-Evolution von M-MuLV RT hergestellt wird. Das Enzym zeichnet sich durch die höchste Thermostabilität unter den M-MuLV RT-Derivaten aus und hat keine RNase H-Aktivität. Das Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit ermöglicht die Synthese von langen cDNAs bis 20 kb bei erhöhten Temperaturen (bis 65 °C) und übertrifft die Fähigkeit anderer Systeme zur Herstellung von Volllängen-cDNA. Durch höhere Syntheseraten kann die Reaktion in 30 Minuten abgeschlossen werden.

Das neue Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit mit dsDNase bietet einen wesentlich vereinfachten Arbeitsablauf, der aus der Beseitigung genomischer DNA und der cDNA-Synthese ein Ein-Röhrchen-Verfahren macht. Das Kit enthält eine neuartige, Doppelstrang-spezifische DNase (dsDNase), die entwickelt wurde, um kontaminierende genomische DNA aus RNA-Präparaten innerhalb von 2 Minuten zu entfernen, ohne die Qualität oder Menge der RNA zu beeinträchtigen. Durch die hochspezifische dsDNase-Aktivität in Bezug auf doppelsträngige DNA wird sichergestellt, dass einsträngige DNA (wie cDNA und Primer) nicht gespalten wird und mit dsDNase behandelte RNA direkt zur reversen Transkription zugegeben werden kann.

Im Kit ist Maxima H Minus Reverse Transkriptase (RT) enthalten – ein leistungsstarkes Enzym, das durch In-vitro-Evolution von M-MuLV RT hergestellt wird. Das Enzym zeichnet sich durch die höchste Thermostabilität unter den M-MuLV RT-Derivaten aus und hat keine RNase H-Aktivität. Das Maxima H Minus Erststrang-cDNA-Synthese-Kit ermöglicht die Synthese von langen cDNAs bis 20 kb bei erhöhten Temperaturen (bis 65 °C) und ersetzt die Fähigkeiten anderer Systeme zur Herstellung von cDNA in voller Länge. Durch höhere Syntheseraten kann die Reaktion in 30 Minuten abgeschlossen werden.
Das neue Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit mit dsDNase bietet einen wesentlich vereinfachten Arbeitsablauf, der aus der Beseitigung genomischer DNA und der cDNA-Synthese ein Ein-Röhrchen-Verfahren macht. Das Kit enthält eine neuartige, Doppelstrang-spezifische DNase (dsDNase), die entwickelt wurde, um kontaminierende genomische DNA aus RNA-Präparaten innerhalb von 2 Minuten zu entfernen, ohne die Qualität oder Menge der RNA zu beeinträchtigen. Die hochspezifische dsDNase-Aktivität gegenüber doppelsträngiger DNA gewährleistet, dass einzelsträngige DNA (wie cDNA und Primer) nicht gespalten wird und mit dsDNase behandelte RNA direkt zur reversen Transkription zugegeben werden kann.

Besondere Merkmale

• Integrierter Schritt zur Genom-DNA-Entfernung
• Höhere Reaktionstemperaturen – der erste Strang der cDNA kann innerhalb des Temperaturbereichs von 42 bis 65 °C synthetisiert werden
  •Hohe Ausbeute an Erststrang-cDNA in voller Länge – mit RNA Templates bis zu 20 kb
• Flexibles Priming – Oligo(dT)₁₈-, Random-Hexamer- oder genspezifische Primer

• Erststrang-cDNA-Synthese für RT-PCR
• Aufbau von cDNA-Bibliotheken
• Erzeugung von Sonden für die Hybridisierung
• Antisense-RNA-Synthese

• Das Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit enthält Maxima H Minus Enzymgemisch, Oligo(dT)₁₈- und Random-Hexamer-Primer, 5X RT-Puffer, dNTP-Gemisch und nukleasefreies Wasser.
• Das Maxima H Minus Erststrang-cDNA-Synthese-Kit mit dsDNase enthält zusätzlich zu den oben aufgeführten Komponenten dsDNase und 10x dsDNase-Puffer.

• Das Maxima H Minus Enzymgemisch enthält Maxima H Minus reverse Transkriptase und RiboLock RNase-Inhibitor. Der RiboLock RNase-Inhibitor schützt RNA-Templates bei Temperaturen bis zu 55 °C wirksam vor dem Abbau durch die RNasen A, B und C.
• Oligo(dT)₁₈- und Random-Hexamer-Primer sind im Kit enthalten. Die Random-Hexamer-Primer binden nicht spezifisch und werden verwendet, um cDNA von allen RNAs in einer RNA-Gesamtpopulation zu synthetisieren. Der Oligo(dT)₁₈-Primer bindet selektiv an das 3'-Ende der Poly(A)-RNA, was dazu führt, dass cDNA nur von mRNA mit Poly(A)-Schwanz synthetisiert wird. Für die Synthese einer bestimmten Sequenz können zudem genspezifische Primer eingesetzt werden.
• Das 10 mM dNTP-Gemisch ist eine vorgemischte, wässrige Lösung aus dATP, dTTP, dCTP und dGTP
• Zur Reaktionsvorbereitung und Verdünnung der Proben-DNA ist Nuklease-freies Wasser im Lieferumfang enthalten. Mit Hilfe geeigneter Qualitätsprüfungen wurde sichergestellt, dass keine Endo-, Exodesoxyribonucleasen, Ribonukleasen und Phosphatasen vorhanden sind. †Beachten Sie, dass sich der Name dieses Produkts geändert hat. Der bisherige Name ist Revertaid Premium First Strand cDNA Synthes

Gefahrstoff: Nein
Qualitätskontrolle: Funktionell getestet in RT-PCR unter Verwendung von 100 fg GAPDH-RNA-Kontrolle und GAPDH-Kontrollprimer, erzeugen nach der Ethidiumbromid-Färbung ein prominentes 496 bp-Produkt auf 1%igem Agarose-Gel.
Lagerungsbedingungen: -20 °C