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Invitrogen™ BLOCK-iT™ U6 RNAi Entry Vector Kit
Bietet einen einfachen, optimierten Ansatz zum Klonieren von kurzen Hairpin-RNA (shRNA)-Sequenzen für die transiente Transfektion zur Untersuchung der RNA-Interferenz (RNAi)
Marke: Invitrogen™ K494500
Includes: Das BLOCK-iT™ U6-Eingabevektor-Kit enthält zwei Boxen. Die Klonierungsbox enthält vier Röhrchen mit linearisiertem Vektor bei 5 ng/Röhrchen, sodass 5 Klonierungsreaktionen pro Röhrchen abgeschlossen werden können. Ebenfalls enthalten sind 250 μl 10x Annealing-Puffer, 20 μl T4-DNA-Ligase, 80 μl 5x DNA-Ligase-Puffer, 1,4 ng lacZ-Kontroll-Oligo, 10 μl gefriergetrocknetes lacZ-Kontrollplasmid, 1,5 ml DNase/RNase-freies Wasser und je 2 μg Vorwärts- und Rückwärts-Sequenzierungsprimer.
Beschreibung
Bei einem einfachen Klonierungsverfahren wird eine ca. 50 bp-Oligonukleotid-DNA unmittelbar nach einem U6-Pol III-Promotor platziert. Die Expression dieser RNAi-Kassette bildet ein shRNA-Molekül in der Zelle, das verarbeitet wird und als siRNA (small interfering RNA) den RNAi-Effekt generiert.
Bereitstellung der U6-RNAi-Kassette
Sobald die Klonierung abgeschlossen ist, ist der U6-Eingabevektor bereit für die sofortige Verwendung bei transienten Transfektionen mit einem Reagenz wie Lipofectamine™ 2000. Dies macht dieses System ideal für erste shRNA-Screenings in vielen Säugetierzelltypen. Als Alternative zu schwer transfect- oder nicht-teilenden Zelltypen oder zur Lieferung an Tiermodellsysteme kann die RNAi Kassette problemlos in einen BLOCK-iT Viral RNAi Vektor umkombiniert werden. Für eine konstante shRNA-lentivirale Abgabe und Expression kombinieren Sie den BLOCK-iT U6-Eingabevektor mit dem pLenti6/BLOCK-iT RNAi-Vektor. Für die transiente Abgabe an anspruchsvolle Zelltypen mit Adenoviraltransduktion, rekombinieren Sie mit dem pAd/BLOCK-iT RNAi Vektor. Stellt eine bevorzugte Technik für die Analyse der Gen-Down-Regulation dar.
Klonierung, Gateway Klonierung, RNAi, RNAi, Epigenetik und nicht-kodierende RNA-Forschung, vektorbasierte RNAi
Spezifikation
| RNAi Einstiegs-Vektorkit | |
| Gateway™ | |
| Transfektion | |
| BLOCK-iT RNAi-Vektoren | |
| Kit | |
| 20 Konstruktionen |
| Das BLOCK-iT™ U6-Eingabevektor-Kit enthält zwei Boxen. Die Klonierungsbox enthält vier Röhrchen mit linearisiertem Vektor bei 5 ng/Röhrchen, sodass 5 Klonierungsreaktionen pro Röhrchen abgeschlossen werden können. Ebenfalls enthalten sind 250 µl 10x Annealing-Puffer, 20 µl T4-DNA-Ligase, 80 µl 5x DNA-Ligase-Puffer, 1,4 ng lacZ-Kontroll-Oligo, 10 µl gefriergetrocknetes lacZ-Kontrollplasmid, 1,5 ml DNase/RNase-freies Wasser und je 2 µg Vorwärts- und Rückwärts-Sequenzierungsprimer. Vektoren, Puffer, Kontroll-Oligo und -Plasmid, Wasser sowie Sequenzierungsprimer bei -20 °C lagern. Die One Shot™ Box enthält Transformationsreagenzien, darunter 21 50 µl-Aliquote von One Shot™ TOP10 chemisch kompetenten E. coli, SOC-Medium und ein superhelikales pUC19-Kontrollplasmid. Bei -80°C lagern. Alle Reagenzien bleiben bei ordnungsgemäßer Lagerung garantiert 6 Monate stabil. | |
| Konstitutiv | |
| shRNA | |
| U6 | |
| Block-iT™ |
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