Invitrogen™ CellEvent™ Caspase-3/7 Detection Reagents

Beschreibung

CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenz Grün und CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenz Rot sind neuartige fluorogene Substrate für aktivierte Caspase-3/7 in lebenden Zellen, die sich mit Arbeitsabläufen für den Antikörpernachweis wie Immunfluoreszenz (IF) und Immunozytochemie (ICC) fixieren und multiplexen lassen. Aktivierung von Caspase-3 ist ein Ereignis während der Apoptose, was diese zu optimierten Reagenzien für die Analyse apoptotischer Zellen macht. CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenz Rot ist auch zum Nachweis von Apoptose in GFP exprimierenden Zellen einsetzbar.

Leistungsmerkmale dieser Indikatoren sind:
• Optimiertes Caspase-3/7-Substrat für die Apoptose-Analyse
• Einfach zu verwenden – Hinzugeben und ablesen; keine Zelllyse erforderlich
• Verwendung für Zeitverlaufsmessungen; einfache Auswahl des gewünschten Zeitpunkts
• Kompatibel mit Live-Zellfluoreszenz-Bildgebung und Formaldehyd-basierten Fixiermethoden
• Multiplex-fähig – In Kombination mit anderen fluoreszierenden Reagenzien zur Bestätigung der Apoptose in derselben Zelle oder Zellpopulation

CellEvent™ Caspase-3/7 Nachweisreagenz Grün: ∼502/530 nm Absorptions-/Emissionsmaxima. Mit dem herkömmlichen FITC/GFP-Filtersatz nachweisbar.

CellEvent™ Caspase-3/7 Nachweisreagenz Rot: ∼590/610 nm Absorptions-/Emissionsmaxima. Mit dem herkömmlichen Texas Red-Filtersatz nachweisbar.

CellEvent™ Caspase-3/7 Nachweisreagenz Rot und CellEvent™ Caspase-3/7 Nachweisreagenz Grün werden als Trockenpulver geliefert. Einfach 100 μl PBS zu Trockenpulver zugeben und so eine 100 x-Stammlösung erzeugen. Diese 100 x-Stammlösung dann 1:100 in Komplettmedium verdünnen, Zellen 30 bis 60 Minuten lang färben und Sie unter dem Fluoreszenzmikroskop analysieren.

CellEvent™ Caspase-3/7 Nachweisreagenz Rot wird auch als bereits vorbereitete DMSO-Lösung geliefert. Die DMSO-Lösung ist eine gebrauchsfertige 400 x-Stammlösung. Einfach in Wachstumsmedien 1:400 verdünnen und Zellen dann 30 bis 60 Minuten lang färben.

Zum Verhindern des Auswaschens apoptotischer Zellen ist am Ende der Färbephase kein Waschen erforderlich. Gefärbte Zellen können in Echtzeit analysiert oder mit 4%iger Paraformaldehydlösung wie Image-IT™ Paraformaldehyd 4 % in 0,1 mol Phosphatpuffer, pH-Wert 7,4, Kat.- Nr. I28800 fixiert werden. Diese fixierten Zellen lassen sich für den ICC-Arbeitsablauf weiterverarbeiten.

Substratspezifika
CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenzien bestehen aus einem Nukleinsäure bindenden Farbstoff, der mit einem aus vier Aminosäuren bestehenden Peptid (DEVD) konjugiert ist. Die DEVD-Peptidsequenz ist eine Spaltstelle für Caspase-3/7, und der konjugierte Farbstoff fluoresziert erst, nach seiner Trennung vom Peptid und der Bindung an DNA.

Wirkprinzipien
CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenz Grün ist intrinsisch nicht fluoreszierend, da das DEVD-Peptid die Fähigkeit des Farbstoffs zur Bindung an DNA hemmt. Nach der Aktivierung von Caspase-3/7 in apoptotischen Zellen wird das DEVD-Peptid jedoch gespalten, wodurch sich der Farbstoff an DNA binden und eine helle fluorogene Reaktion erzeugen kann.

Einfaches Protokoll in drei Schritten
Zur Verwendung von CellEvent Caspase 3/7 Nachweisreagenz dieses einfach zu den Zellen zugeben, 30 bis 60 Minuten lang inkubieren und dann visualisieren. Apoptotische Zellen mit aktivierter Caspase-3/7 haben hellgrüne bzw. hellrote Zellkerne, während Zellen ohne aktivierte Caspase 3/7 ein minimales Fluoreszenzsignal aufweisen.

Die Assay-Vielseitigkeit ermöglicht die Erkennung und Fixierung von lebenden Zellen
Dieser robuste Assay gestattet die Untersuchung der Caspase-3/7-Aktivierung in lebenden Zellen. Da für die Erkennung keine Waschschritte erforderlich sind, bleiben fragile apoptotische Zellen, die bei Waschschritten in der Regel verloren gehen, erhalten. Wichtig ist auch, dass das Fluoreszenzsignal des CellEvent Caspase-3/7 Nachweisreagenz' die Fixierung und Permeabilisierung übersteht. Das gibt dem Anwender die Flexibilität, Endpunkt-Assays durchzuführen und mittels Immunzytochemie auf anderen Proteinen von Interesse zu prüfen.