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Invitrogen™ Click-iT™ Plus EDU Alexa Fluor™350 Durchflusszytometrie-Assay-Kit
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 Durchflusszytometrie-Assay-Kit
Marke: Invitrogen™ C10645
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Beschreibung
Das Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 Durchflusszytometrie-Assay-Kit ist ein einfacher, stabilerer Assay für die Analyse der DNA-Replikation in proliferierenden Zellen im Vergleich zu herkömmlichen BrdU-Methoden. Neu synthetisierte DNA wird mit dem UV-Laser des Durchflusszytometers analysiert. Die Click-iT Plus-Formulierung ist kompatibel mit standardmäßigen Fluorophoren, einschließlich R-PE-und R-PE-Tandems, sowie fluoreszierenden Proteinen.Auswahlhilfe für alle Click-iT EdU- und Click-iT Plus EdU-Assays für die Durchflusszytometrie.
Multiplexfähig
Click-iT Plus Alexa Fluor 350 EdU Assays können in Verbindung mit R-PE- und R-PE-Tandems sowie fluoreszierenden Proteinen wie GFP und mCherry verwendet werden. Das Markierungsreagenz Alexa Fluor 350 wird bei 350 nm mit einem UV-Laser leicht angeregt und bei 438 nm abgegeben.
Eine moderne Methode für Ergebnisse, die BrdU überlegen sind
Die präziseste Methode der Proliferationsanalyse ist die direkte Messung der DNA-Synthese. Ursprünglich wurde dies mit der Einbindung radioaktiver Nukleoside durchgeführt. Diese Methode wurde durch die Antikörper-basierte Erkennung des Nukleosid-Analogons Bromdesoxyuridin (BrdU) ersetzt. Das Click-iT Plus EdU Durchflusszytometrie-Assay ist eine neuartige Alternative zum BrdU-Assay. EdU (5-Ethynyl-2´-Deoxyuridin) ist ein Thymidin-Analogon und wird während der aktiven DNA-Synthese in die DNA eingebunden. Die Erkennung beruht auf Klick-Chemie, einer Kupfer-katalysierten kovalenten Reaktion zwischen einem Azid und einem Alkin. In dieser Anwendung befindet sich das Alkin auf der Ethynylverbindung der EdU, während das Azid mit dem Alexa Fluor Farbstoff gekoppelt ist. Standardmethoden der Durchflusszytometrie werden zur Bestimmung des prozentualen Anteils der S-Phase-Zellen in der Population verwendet.
Milde Bedingungen ermöglichen die Verwendung mit Zellzyklus-Farbstoffen und Antikörpern
Die geringe Größe des Farbstoffazids ermöglicht den effizienten Nachweis der integrierten EdU unter milden Bedingungen. Während die Standardfixierung auf Aldehydbasis und die Permeabilisierung von Waschmitteln ausreichen, kann das Click-iT Plus Detektionsreagenz auf die DNA zugreifen. Dies steht im Gegensatz zu BrdU-Assays, die eine Denaturierung der DNA (mit HCI, Wärme oder Verdauung mit DNase) zur Exposition des BrdU erfordern, so dass es mit einem anti-BrdU-Antikörper nachgewiesen werden kann. Probenverarbeitung für das BrdU-Assay kann zu Signalveränderungen in der Zellzyklus-Verteilung sowie Zerstörung der Antigenerkennungsstellen führen, wenn die HCl-Methode verwendet wird. Im Gegensatz dazu ist das anwenderfreundliche Click-iT Plus EdU-Assay mit Zellzyklus-Farbstoffen kompatibel. Das Click-iT Plus EdU-Assay kann auch mit Antikörpern gegen Oberflächen- und intrazelluläre Marker sowie gegen mit Standard-Fluorophoren markierte Konjugate, einschließlich R-PE, R-PE-Tandems und fluoreszierender Proteine (GFP und mCherry), gebündelt werden.
Schnelles und einfaches Protokoll
Das Click-iT Plus EdU-Protokoll basiert auf den Schritten der Aldehydfixierungs- und Lösungsmittelpermeabilisierung zur immunhistochemischen Antikörper-Markierung. Jedoch ist EdU mit anderen Fixierungs-/Permeabilisierungswirkstoffen, einschließlich Saponin und Methanol, kompatibel. Nur fünf Arbeitsgänge sind in Vorbereitung Ihrer Zellproliferationsdaten-Analyse erforderlich:
1. Behandlung von Zellen mit EdU.
2. Fixieren und Permeabilisieren von Zellen.
3. Nachweis von S-Phase-Zellen mit Click-iT Plus Nachweis-Cocktail für die Dauer von 30 Minuten.
4. Einmal waschen.
5. Analysieren.
Ergebnisse stehen unter bestimmten Umständen bereits nach 60 Minuten zur Verfügung, wir empfehlen jedoch 90 Minuten für alle Anwendungen.
Spezifikation
| EdU (5-Ethynyl-2‘-Deoxyuridin), Alexa Fluor 350 Picolylazid, wasserfreies Dimethylsulfoxid (DMSO), Click-iT Fixiermittel, Click-iT Saponin-basierte Permeabilisierung und Waschpuffer, Kupferschutzmittel und Click-iT EdU Pufferadditiv | |
| 438 nm | |
| Click-iT™ Plus EDU Alexa Fluor™ 350 Durchflusszytometrie-Assay-Kit |
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.