Thermo Scientific™ DNase I-Lösung (1 Einheit/μl), RNase-frei

Beschreibung

Desoxyribonuklease I (DNase I) ist ein glykosyliertes Einzelstrang-Polypeptid, das unerwünschte Einzel- und Doppelstrang-DNA entfernt. Dazu spaltet das Enzym die DNA in 5' Phosphodinukleotide und kleine Oligonukleotid-Fragmente auf. DNase I ist ein gängiger Zusatz für Zelllysereagenzien, um der durch die DNA verursachten Viskosität in bakteriellen Zelllysaten entgegen zu wirken; darüber hinaus werden die DNA-Templates aus RNA entfernt, die im Rahmen der In-vitro-Transkription erzeugt wurde. Es sind zwei Formen von DNAse erhältlich: Die erste Variante ist bei Proteinanwendungen ausreichend, die zweite eignet sich für alle Anwendungen, die auf DNA-Verdau bei gleichzeitiger Vermeidung von RNA-Beschädigung angewiesen sind.

Leistungsmerkmale:

• Zerlegt und entfernt unerwünschte DNA aus Proben
• Spaltet sowohl Einzel- als auch Doppelstrang-DNA
• Kompatibel mit Thermo Scientific Pierce-Zelllyse-Reagenzien
• Reduziert die Viskosität bakterieller Lysate (Proteinextrakte), um das Pipettieren zu erleichtern
• Wird als 50 %-ige Glycerinstammlösung in 10 mM Tris-HCl (pH-Wert 7,5), 10 mM CaCl₂, 10 mM MgCl₂ geliefert
• In zwei praktischen Formaten erhältlich: RNase-getestetes Format für den Schutz von RNA (Art.-Nr. 89836) und preisgünstiges Format für die Proteinextraktion (Art.-Nr. 90083)

• Für die DNase I-Aktivität werden Kalziumionen benötigt. Unter Umständen liegen Spuren von Ca in ausreichender Menge für die DNase-Aktivität vor, doch der Gebrauch von EGTA oder Kalzium-freien Puffern kann die DNase I-Aktivität auf ein nicht mehr nachweisbares Niveau reduzieren.
• Hohe Konzentrationen (d.h. 100 mM) monovalenter Ionen wie Na+ und K+ reduzieren die DNase I-Aktivität
• Wird DNase I 10 min lang auf 65 °C erwärmt, verliert es seine Aktivität
• Kunitz-Einheiten: 1 Kunitz-Einheit ist als die Enzymmenge definiert, die benötigt wird, um aufgrund der Degradierung hochpolymerer DNA Inkremente bei 260 nm von 0,001 nm/min/ml bei 25 °C in 0,1 M NaOAc, pH 5,0 zu erzeugen
• Einheiten des Degradationsassays: 1 Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die erforderlich ist, um 1 mg Plasmid-DNA in 10 Minuten bei 37 °C in 10 mM Tris-HCl, pH 7,5, 50 mM MgCl₂, 13 mM CaCl₂ vollständig abzubauen

• Aussehen: Klare Flüssigkeit
• Konzentration: 1 Einheit/ml
• Aktivität: ≥ 100.000 Einheiten/mg Protein
• RNase-Kontamination: Nach Inkubation mit 3H-markierter Poly(A) RNA setzten 20 Einheiten < 2 % nicht in Ethanol ausfällbare Bestandteile frei.
• Funktionelle Analyse: 1μl Enzym baut < 5 % der RNA, aber 100 % der DNA ab.

• Aussehen: Klare farblose Flüssigkeit, frei von unlöslichem Material.
• Einheiten: ≥2.500 Einheiten/ml
• Definition von Einheit: 1 Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die benötigt wird, die Absorption von hochpolymerer DNA bei 260 nm und 25 °C um Inkremente von 0,001/min/ml zu erhöhen

• Beseitigung der durch den DNA-Anteil in den proteinhaltigen Zelllysaten verursachten Viskosität
• Entfernung der DNA-Matrizen aus RNAs, die bei der in vitro-Transkription entstehen