Thermo Scientific™ Pierce™ Coomassie Brilliant Blue Dyes

Beschreibung

Thermo Scientific Pierce Coomassie Brilliant Blue dyes are composed of one of the most common forms of coomassie dye, which is a key component of various colorimetric protein gel stains. Coomassie R-250 and G-250 dyes are two chemical forms of a disulfonated triphenylmethane compound that is commonly used as the basis of stains for detection of proteins in gel electrophoresis and Bradford-type assay reagents for protein quantitation. The R-250 (red-tinted) form lacks two methyl groups that are present in the G-250 (green-tinted) form, which is also called colloidal coomassie dye.

Die Farbstoffe Coomassie R-250 und G-250 sind zwei chemische Formen einer disulfonierten Triphenylmethanverbindung, die häufig für Färbungen zum Nachweis von Proteinen in der Gelelektrophorese und Bradford-Assay-Reagenzien zur Proteinquantifizierung verwendet wird. Der R-250-Form (rot getönt) fehlen zwei Methylgruppen, die in der G-250-Form (grün getönt), die auch als kolloidaler Coomassie-Farbstoff bezeichnet wird, vorhanden sind.

Üblicherweise werden Coomassie-Gelfärbemittel und Proteinassay-Reagenzien als sehr saure Lösungen in 25 bis 50 % Methanol formuliert. Unter sauren Bedingungen bindet der Farbstoff hauptsächlich durch basische Aminosäuren (vor allem Arginin, Lysin und Histidin) an Proteine, und die Anzahl an jedem Proteinmolekül gebundener Coomassie-Farbstoffliganden ist ungefähr proportional zur Anzahl positiver Ladungen auf dem Protein. Die Proteinbindung bewirkt, dass der Farbstoff von rotbraun zu hellblau wechselt (die maximale Absorption entspricht 595 nm).

Die Merkmale beinhalten:
• Einfacher Nachweis — entwickelt intensiv gefärbte Komplexe mit Proteinen
• Hohe Empfindlichkeit — kann einen Proteingehalt von nur 0,5 µg/cm2 in einer Gelmatrix bestimmen
• Umkehrbare Färbung — das Anion von Coomassie Brillant Blue im sauren Färbemedium verbindet sich durch elektrostatische Wechselwirkung mit den protonierten Aminogruppen von Proteinen; der resultierende Komplex ist unter den richtigen Bedingungen reversibel
• Differenzierung zwischen gebundenem und ungebundenem Farbstoff — wenn in 0,01 M Citratpuffer bei pH 3,0 aufgelöst, liegt das Absorptionsmaximum bei 555 nm; der Protein-Farbstoff-Komplex zeichnet sich durch eine etwas breitere Spitze aus als die des freien Farbstoffs mit einem Maximum bei 549 nm