Thermo Scientific™ CloneJET PCR-Klonierungskit

Beschreibung

Beim CloneJET PCR Cloning Kit handelt es sich um ein leistungsstarkes System zur Positivselektion für die hocheffiziente Klonierung von PCR-Produkten, die mit einer beliebigen thermostabilen DNA-Polymerase hergestellt wurden. Beliebige andere DNA-Fragmente mit glatten (Blunt End) oder überhängenden Enden (Sticky-End) können kloniert werden. Das Kit ist ideal für phosphorylierte oder nicht-phosphorylierte DNA-Fragmente. Die Ligation in den beiliegenden Vektor zur Positivselektion dauert nur 5 Minuten und führt zu einer Ausbeute von über 99 % rekombinanter Klone. Die mit einem Proofreading-Enzym hergestellten PCR-Produkte mit stumpfen Ende werden direkt in den Klonierungsvektor ligiert.

PCR-Produkte, die mit Non-Proofreading-DNA-Polymerasen (z. B. Taq-Polymerase) oder DNA Polymerase-Mischungen hergestellt wurden, werden vor der Ligation 5 Minuten lang mit dem im Kit enthaltenen thermostabilen DNA-Blunting-Enzym inkubiert. Alle im Labor gängigen E. coli-Stämme können direkt mit dem Ligationsprodukt transformiert werden.

Das Kit enthält den neuartigen, gebrauchsfertigen Klonierungsvektor pJET1.2/blunt zur Positiv-Selektion. Der Vektor enthält ein letales Restriktionsenzymgen, das durch Ligation eines DNA-Inserts in die Klonierungsstelle unterbrochen wird. Dementsprechend können nur Bakterienzellen mit rekombinanten Plasmiden Kolonien bilden. Rezirkulierte pJET1.2/blunt-Vektormoleküle, die kein Insert haben, exprimieren das letale Restriktionsenzym, wodurch die E. coli-Wirtszelle nach der Transformation abgetötet wird. Diese Positiv-Selektion beschleunigt drastisch das Kolonie-Screening und vermeidet zusätzliche Kosten für die Blau-Weiß-Selektion. Der pJET1.2/blunt cloning vector multiple cloning site enthält zwei, die Insertionsstelle flankierende, BgLII-Erkennungssequenzen für den erleichterten Nachweis und die Bearbeitung des Inserts. Darüber hinaus enthält der Vektor einen T7-Promoter für die In vitro- und In vivo-Transkription sowie die Sequenzierung des Inserts.

• Schnell – PCR-Klonierung in nur 5 Minuten
• Höchste Effizienz – > 99 % positive Klone
• Kein Klonierungshintergrund – Positiver Selektionsvektor
• Vielseitig – Ideal für die Klonierung mit stumpfem oder überhängendem Ende
• Wirtschaftlich – Kein kostenintensives Blau-Weiß-Screening

Empfohlen für:

Klonierung von PCR-Produkten mit stumpfem Ende oder 3‘-dA-Schwanz bis zu 10 kb; Klonierung von Fragmenten, die mit Restriktionsenzymen hergestellt wurden; Sequenzierung klonierter DNA; In vitro- und In vivo-Transkription klonierter Inserts vom T7-Promoter

Hinweis:

Das Ligationsgemisch muss vor der Elektroporation in einer Säule aufgereinigt, z. B. mit dem GeneJET PCR-Reinigungskit, †K0701, oder mit Chloroform extrahiert werden. Elektroporation ist in der Gegenwart von Proteinen und Salzen im Gemisch nicht zulässig.