Invitrogen™ CyQUANT™ MTT and XTT Cell Viability Assays

Beschreibung

CyQUANT MTT and XTT Cell Viability assays are colorimetric microplate assays used to measure the metabolic activity of cells, which is an indicator of cell viability, proliferation, and cytotoxicity. CyQUANT MTT and XTT function as cell health indicators by using the cellular redox potential of live cells to convert a tetrazolium-based salt reagent, MTT or XTT, to a brightly colored formazan product. The absorbance of the formazan can be measured using a microplate reader and correlates with the number of metabolically active cells to quantitively measure cell viability and proliferation.

Das Kit besteht aus zwei Reagenzien – XTT-Reagenz und Elektronenkopplungsreagenz. Das XTT Reagenz wird zur Beurteilung der Zellviabilität als Funktion des zellulären Redoxpotentials verwendet, während das Elektronenkopplungsreagenz den dynamischen Bereich des Assays verbessert.

Der Assay reicht für zehn 96-Well Platten und besteht aus zehn Flaschen mit XTT Reagenz und zehn Röhrchen mit Elektronenkopplungsreagenz. Je eine Flasche von beiden Reagenzien (ausreichend für eine 96-Well Platte) wird aufgetaut, gemischt, zu den Zellen hinzugefügt und inkubiert. Das Viabilitätssignal wird mit einem auf Absorption basierenden Mikrotiterplatten-Lesegerät nachgewiesen. Beim aktiven Respirieren lebensfähiger Säugetierzellen wird das wasserlösliche XTT-Reagenz reduziert und in ein orangefarbenes Formazan-Produkt umgewandelt.

Zu den Merkmalen des CyQUANT™ XXT Zellviabilitätsassays gehören:
• Hochreproduzierbarer, auf Absorption basierender Viabilitätsassay
• Verbesserter dynamischer Bereich und höhere Empfindlichkeit im Vergleich zu anderen kolorimetrischen Viabilitätsassays
• Einfaches Mix-and-Read-Format, das für jeweils eine 96-Well Platte konfiguriert ist
• Nicht toxischer, kontinuierlicher Assay — Erfassung mehrerer Zeitpunkte ohne Zelllyse möglich

Die Messung von Änderungen der Lebensfähigkeit der Zellen ist eine grundlegende Methode zur Beurteilung der Zellgesundheit, der Bestimmung der Genotoxizität und der Evaluierung von Krebsmedikamenten. Kolorimetrische Viabilitätsassays sind wirtschaftlich und bieten von Well zu Well konsistente Ergebnisse mit geringer Variabilität. Im Gegensatz zu anderen handelsüblichen kolorimetrischen Viabilitätsassays für Säugetierzellen weisen XTT-basierte Assays einen hohen Dynamikbereich und eine geringe Variabilität auf. Der Assay bietet noch bessere Performance, ist kontinuierlich und erfordert keine Zell-Lyse oder Solubilisierung.

Der CyQUANT™ XTT Zellviabilitätsassay ist ein vollständiges und optimiertes Kit für den Nachweis der Lebensfähigkeit von Säugetierzellen. Das Assay-Kit enthält XTT-Reagenz (2,3-bis-(2-Methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilid) und Elektronenkopplungsreagenz. Das XTT-Reagenz, eine Tetrazolium-basierte Verbindung, ist empfindlich gegenüber zellulärem Redoxpotential und wandelt sich in Gegenwart aktiv respirierender Zellen von einer wasserlöslichen Verbindung zu einem orangefarbenen Formazan-Produkt um. Die Empfindlichkeit und Konsistenz des Assays wird bei Verwendung mit dem Elektronenkopplungsreagenz deutlich erhöht.

Da für den Nachweis keine Zelllyse oder Löslichkeit erforderlich sind, kann der XTT-Assay kontinuierlich eingesetzt werden, um Analysen mit mehreren Zeitpunkten durchzuführen. Darüber hinaus generiert der CyQUANT™ XTT Assay Viabilitätsergebnisse aus verschiedensten Zelllinien, einschließlich Primär- und Suspensionszellen.

Für jede 96-Well Platte werden eine Flasche XTT Reagenz und ein Röhrchen mit Elektronenkopplungsreagenz aufgetaut und gemischt, um eine Stammlösung zu erzeugen; diese wird den Zellen hinzugefügt, wobei die Zellviabilität nach einer 2- bis 4-stündigen Inkubation nachgewiesen werden kann. Das Assay-Kit enthält alle Materialien, die für 96-Well Platten benötigt werden.

Es wird empfohlen, die Stock-Lösung aus XTT- und Elektronenkopplungs-Reagenz bald nach dem Mischen zu verwenden. Die Assay-Leistung wird beeinträchtigt und die Empfindlichkeit reduziert, wenn die Stock-Lösung über längere Zeit bei Raumtemperatur aufbewahrt oder Gefrier-/Auftauzyklen unterzogen wird. Um Performance und Reproduzierbarkeit des Assays zu gewährleisten, besteht der CyQUANT™ XTT Cell Viability Assay aus separaten XTT- und Elektronen-Kopplungs-Reagenzien, die gemischt werden.