Thermo Scientific Kits SMART Digest und SMART Digest ImmunoAffinity (IA)
Die Thermo Scientific™ SMART Digest™ und SMART Digest ImmunoAffinity (IA) Kits dienen dem Proteinverdau bei der biopharmazeutischen Charakterisierung und Quantifizierung von Proteinen. Sie sind einfach in der Anwendung und liefern schnelle, hoch reproduzierbare Ergebnisse.
Die SMART Digest Kits bieten alles für den Proteinverdau Notwendige in einem Paket. Ihre Technologie beruht auf einem wärmestabilen Enzym (Trypsin, Chymotrypsin oder Proteinase K), das während der Herstellung wahlweise an magnetisch oder nichtmagnetisch Beads gebunden und damit immobilisiert wird. So eröffnen sich völlig neue Möglichkeiten für Verfahren zum Proteinverdau.
Einfach in der Anwendung: Nur wenige, einfache Schritte sind erforderlich
Der vorgefertigte Puffer aus dem Kit wird zu den immobilisierten Enzym-Beads gegeben, die in Mikrozentrifugenröhrchen oder entsprechend den Anforderungen auch lose verpackt mitgeliefert werden. Anschließend wird die Probe hinzugegeben und die Mischung über einen vordefinierten Zeitraum geschüttelt inkubiert. Anschließend wird die Probe aufgereinigt und analysiert.
Schnell: Der Proteinverdau geschieht innerhalb weniger Minuten statt über Nacht
Jedes Mikrozentrifugenröhrchen enthält 14 µg immobilisiertes Enzym, das von 200 pg bis zu 3,5 mg Gesamtprotein verdauen kann.
Damit wird nicht nur der Verdauungsvorgang drastisch beschleunigt, auch der Schritt der Proteinquantifizierung kann unter Umständen ganz entfallen.
Hoch reproduzierbar: SMART Digest Kits liefern hoch reproduzierbare Ergebnisse auch bei unterschiedlichen Anwendern
Dies wird dadurch erreicht, dass viele der bisher benötigten Chemikalien und aufwendigen Arbeitsschritte für einen Verdau entfallen, wodurch chemisch ausgelöste posttranslationale Modifikationen (PTMs) und Autolysen abgeschwächt werden.
Die Chromatogramm-Grafik unten zeigt drei übereinander gelegte Chromatogramme desselben monoklonalen Antikörpers, die an drei Tagen von drei unterschiedlichen Anwendern angefertigt wurden. Ihre RSD beträgt < 5 %.
Die SMART Digest ImmunoAffinity (IA) Kits
Die SMART Digest ImmunoAffinity (IA) Kits bieten alle Vorteile der SMART Digest Kits mit dem zusätzlichen Vorteil, dass der Immunaffinitäts- und der Verdauungsprozess in nur einem Well zusammengefasst werden.
Davon profitieren insbesondere Quantifizierungsuntersuchungen, denn hier werden häufig Immunaffinitätsverfahren eingesetzt, um vorab die Zielmoleküle aus einer komplexen biologischen Probe anzureichern und somit die Testempfindlichkeit zu erhöhen. Der Verdauungsvorgang erfolgt im Anschluss.
SMART Digest IA Kits machen die Verfahren:
- Einfach und leicht
- Schnell: nur wenige Stunden statt über Nacht
- Hoch reproduzierbar und empfindlich
Inhalt der SMART Digest und SMART Digest IA Kits
Je nach Ihrem Anwendungsbedarf werden die Kits in vielen Varianten bereitgestellt:
- 3 verschiedene Enzymoptionen (Trypsin, Chymotrypsin, Proteinase K)
- in Mikrozentrifugenröhrchen vorverpackte Beads
- lose verpackte Beads für unterschiedliche Well- oder Plattenformate
- magnetische oder nichtmagnetische Beads, je nach Automatisierungsvorrichtung, z. B. für Thermo Fisher Scientific™ KingFisher™ Plattformen
- Optionen für SPE mit Filtration oder Mikroelution zur Aufreinigung von Proben aus komplexen Matrices nach dem Verdauungsprozess