Invitrogen™ Zero Blunt™ TOPO™ PCR Klonierungskit, ohne kompetente Zellen (Kat.

Beschreibung

Enthält den Zero Blunt TOPO Vektor mit dem ccdB-Gen für positive Auswahl, das nur Wachstum von rekombinanten Plasmidvektoren zulässt. Resistent gegen Kanamycin (KanR) und Zeocin™ (ZeoR).
pCRBlunt II-TOPO Vektor: Entwickelt für Proofreading-Polymerasen
Der pCRBlunt II-TOPO Vektor ist zum Klonen von PCR-Produkten mit stumpfer Enden konzipiert, die von thermostabilen Proofreading-Polymerasen wie Platinum™ Pfx DNA-Polymerase generiert werden. Der pCRBlunt II-TOPO Vektor enthält:

• EcoRI-Stellen zu beiden Seiten der Insertionsstelle des PCR-Produkts ermöglichen die problemlose Exzision von Inserts
• Kanamycin- und Zeocin-Resistenzgene für Ihre individuelle Auswahl an E. coli
• SP6-Promoter/Primer-Stelle zur In-vitro-RNA-Transkription und Sequenzierung
• M13-Vorwärts- und Rückwärtsprimer-Stellen für Sequenzierung oder PCR-Screening

pCRBlunt II-TOPO Klon-Selektion
pCRBlunt II-TOPO ermöglicht die direkte Auswahl von Rekombinanten durch Trennung des tödlichen E. coli-Gens ccdB. Der Vektor enthält das Gen ccdB, das mit dem C-Terminus des LacZα-Fragments fusioniert. Die Ligation eines PCR-Produkts mit stumpfem Ende unterbricht die Expression der LacZα-ccdB-Genfusion, wodurch nur das Wachstum von positiven Rekombinanten nach der Transformation ermöglicht wird. Zellen, die einen nicht rekombinanten Vektor enthalten, werden nach dem Auftragen auf Platten abgetötet. Daher ist ein Blau-Weiß-Screening nicht erforderlich.
Vereinfachte TOPO-basierte Klonierung
Mit dem TOPO-Verfahren sind für die Klonierung weder PCR-Primer mit spezifischen integrierten Sequenzen, noch Post-PCR-Verfahren, eine Vektorpräparation oder andere zeitintensive Schritte zur DNA-Manipulation erforderlich. Geben Sie Ihre PCR-Reaktion einfach zum mitgelieferten Vektor mit gebundener Topoisomerase, warten Sie 5 Minuten, und führen Sie die Transformation in kompetente E. coli-Zellen durch.
Effiziente Klonierung
Mit bis zu 95 % der Klone, die das gewünschte Insert tragen, können Sie das Screening der Klone reduzieren, was Zeit und Geld spart. Der in diesem Kit verwendete pCRBlunt II-TOPO Vektor wird mit einem letalen ccdB-Gen geliefert, das eine effiziente Auswahl an Produkten mit stumpfen PCR-Rekombinanten ermöglicht, die durch thermostabile Proofreading-Polymerasen erzeugt werden.
Der Standard in der Klonierung
Bei der Klonierung ist das TOPO™ Verfahren seit über zehn Jahren für Tausende von Wissenschaftlern ein verlässlicher Partner. Die schnelle, einfache und effiziente TOPO™ Klonierung kam bereits bei einer Vielzahl von Vektoren und in unterschiedlichsten Anwendungen zum Einsatz.
Zero Blunt TOPO PCR-Klonierungskit: Kit-Optionen
Das Zero Blunt TOPO PCR-Klonierungskit zur direkten Einführung von PCR-Produkten mit stumpfem Ende in einen Plasmidvektor kann, je nach Bedarf, mit einer Vielzahl kompetenter Zellen, die sich durch unterschiedliche Vorteile auszeichnen, gekauft werden
Allgemeine Klonierung: Top10-Zellen (Kat.-Nr. K2800-20, K2800-40)
Hocheffiziente Klonierung: TOP10 Electrocomp™ Zellen (Kat.-Nr. K2860-01, K2860-40)
Klonierung allgemein, Resistenz gegen Bakteriophagen T1: DH5α-T1R (Kat.-Nr. K2820-20, K2820-40)
Schnelles Wachstum: Mach1™-T1R chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. K2830-20)
Stellen Sie Ihre eigenen Zellen bereit: Mehr Flexibilität und Kosteneffizienz (Kat.-Nr. 450254)
Eine Version des Kits umfasst ein PureLink™ Quick Plasmid-Miniprep-Kit (Katalognr. K2800-02) für die Isolierung von sauberem, sequenzbereiten, rekombinanten Plasmid und ist ebenfalls erhältlich.

• Schnell und praktisch: Von der PCR zum Klon in nur drei Schritten und 5 Minuten
• Effizient: Bis zu 95 % der Klone mit dem korrekten Insert
• Bewährt: Zuverlässige Leistung seit über einem Jahrzehnt mit über 4.000 Referenzen
• Einfach: keine Ligase, Post-PCR-Verfahren oder PCR-Primer bestimmter Sequenzen erforderlich
• Vektor: pCR™Blunt II-TOPO Vektor: Enthält das Gen ccdB, das eine direkte Auswahl von Rekombinanten ermöglicht
• Klonierungsmethode: TOPO Klonierung: Topoisomerase I–basierte Ligation von PCR-Produkten mit stumpfem Ende auf Basis von Topoisomerase I verstärkt mit thermostabilen Proofreading-Polymerasen in 5 Minuten
• Kompetente Zellen: Verschiedene Optionen: Auswahl aus Kits mit allgemeinen, hocheffizienten, bakteriophagen T-beständigen, schnell wachsenden kompetenten Zellen (separat erhältlich) oder verwenden Sie Ihre eigene
• Antibiotische Resistenz: Ampicillin (AmpR), Kanamycin (KanR)

Klonierung, PCR-Klonierung