Thermo Scientific™ Pierce™ S-Nitrosylation Western Blot Kit and HENS Buffer

Beschreibung

The Pierce S-Nitrosylation Western Blot Kit provides cell lysis/reaction buffer, sulfhydryl-reactive blocking agent, reducing agent, labeling agent, and anti-TMT antibody to label 40 samples (100 μg each). As with traditional S-nitrosylation switch assays, unmodified cysteines are blocked by a sulfhydryl-reactive compound. S-nitrosylated cysteines are selectively reduced with ascorbate in HENS Buffer for labeling with iodoTMTzero reagents, which irreversibly bind to the cysteine thiol that was S-nitrosylated. Detection of the TMT reagent-modified proteins is facilitated using an anti-TMT antibody.

S-Nitrosylation ist eine posttranslationale Modifikation, die zahlreiche Prozesse reguliert, einschließlich zellulärer Proliferation, Apoptose, Entspannung der glatte Muskulatur, Neurotransmitter-Freisetzung und Differenzierung. Während der S-Nitrosylation reagieren Stickstoffmonoxid-Radikale mit Cystein-Thiolen, um einen S-NO-Addukt zu erzeugen, der die Proteinaktivität verändert.

Pierce S-Nitrosylation Western Blot Kit
Das Pierce S-Nitrosylation Western Blot Kit enthält die erforderlichen Reagenzien für eine modifizierte Version des herkömmlichen S-Nitrosylierungs-Switch-Assays, einschließlich eines Cystein-blockierenden Reagenz, Reduktionsmittel, Reaktionspuffer, IodoTMT-Kennzeichnungsreagenz und Anti-TMT-Antikörpern. Die Kennzeichnung erfolgt mit dem nicht-biologischen iodoTMT Reagenz anstelle von HPDP-Biotin, was bei der Erkennung im Western Blot zu weniger Hintergrundrauschen führt. Zusätzlich zum Nachweis von S-nitrosylierten Proteinen durch Western Blot kann ein immobilisiertes Anti-TMT-Harz zur selektiven Anreicherung von S-nitrosylierten Proteinen/Peptiden verwendet werden, die mit iodoTMT-Reagenzien gekennzeichnet sind. Dieser Arbeitsablauf ermöglicht die Zuordnung von S-Nitrosylierungsstellen und die Multiplex-Quantifizierung mittels Massenspektrometrie.

Zu den Merkmalen des Pierce S-Nitrosylation Western Blot Kits gehören:
• Spezifisch — Optimierte Kennzeichnungsreaktionen schalten S-Nitrosocystein post-translationale Modifikationen mit iodoTMT-Reagenz zur einfachen Erkennung durch Western Blot mit Anti-TMT-Antikörper
• Verbessertes Signal-Rausch-Verhältnis – Verwendet ein nicht-biologisches iodoTMT-Reagenz zur Kennzeichnung anstelle von HPDP-Biotin, das Ergebnis ist weniger Hintergrund bei der Erkennung von Western Blots
• Methodenkompatibel – Kennzeichnungsmethode ist mit alternativen Analysemethoden kompatibel, einschließlich Anreicherung über Anti-TMT-Harz und Multiplex-Quantifizierung durch Massenspektrometrie
• Praktisch – Benötigte Reagenzien sind im Lieferumfang enthalten

HENS-Puffer
HENS-Puffer besteht aus 100 mM HEPES (pH 7,8), 1 mM EDTA, 0,1 mM Neocuproin und 1 % SDS. Es handelt sich um einen Zelllysepuffer, der für die Verwendung mit dem Pierce S-Nitrosylation Western Blot Kit vorgesehen ist. Dieses Kit ermöglicht den empfindlichen Nachweis von Protein-S-Nitrosocysteiner post-translationalen Modifikationen in einem vollständigen, anwenderfreundlichen Kit.