Invitrogen™ pHrodo™ Dyes for Amine Labeling

Beschreibung

Führen Sie mit den pHrodo pH-Sensorfarbstoffen, einschließlich pHrodo rote, grüne und dunkelrote Farbstoffe, Untersuchungen zur Zellinternalisierung mit niedrigem Signal-Hintergrund und hoher Spezifität durch. Diese Farbstoffe können an Biomoleküle wie Antikörper konjugiert werden und werden nur dann stark fluoreszierend, wenn sie in sauren Umgebungen, wie z. B. in Zell-Lysosomen und -Endosomen, gefunden werden. Dies ermöglicht den Nachweis des konjugierten Biomoleküls im Assay mit lebenden Zellen ohne Waschschritte oder Quencher-Farbstoffe im experimentellen Arbeitsablauf.

pHrodo rote, grüne und dunkelrote Farbstoffe
Die aminreaktiven pH-empfindlichen pHrodo roten, grünen und dunkelroten Farbstoffe sind für die Erstellung von Biokonjugaten optimiert, die für die Untersuchung der Antikörperinternalisierung, Endozytose und Phagozytose in Assays mit lebenden Zellen verwendet werden. Mit den aminreaktiven pHrodo Farbstoffen können Sie primäre Amine auf einem Antikörper, Protein, einer Zelle, einem Virus oder einem anderen aminhaltigen Biomolekül markieren, um ein Konjugat zu erzeugen, das in sauren Umgebungen fluoresziert, aber bei neutralem pH-Wert nur wenig bis kein Signal zeigt. Die fehlende Fluoreszenz von pHrodo Farbstoffen in einer typischen extrazellulären Umgebung macht Waschschritte oder Quencher-Farbstoffe im experimentellen Arbeitsablauf überflüssig.

pHrodo iFL rote und grüne STP Ester-Farbstoffe
Die pHrodo iFL roten und grünen STP Ester-Farbstoffe sind verbesserte Versionen der ursprünglichen pHrodo roten und grünen Farbstoffe und sind optimiert, um löslichere Konjugate als die ursprünglichen Farbstoffe zu erzeugen. Durch diese verbesserte Eigenschaft eignen sie sich für die Markierung von Antikörpern, die andernfalls während der Konjugation aus der Lösung ausfallen könnten.

pHrodo dunkelrote TFP Ester
Der pHrodo dunkelrote TFP Ester unterscheidet sich von pHrodo iFL roten und grünen Esterfarbstoffen dadurch, dass er einen niedrigeren pKs-Wert hat und daher sowohl verbesserte Signal-Rausch-Verhältnisse als auch Fluoreszenzen später im endozytischen Signalweg zeigt. Dieser pHrodo dunkelrote Farbstoff mit geringem Hintergrund macht das Untersuchen der Internalisierung mit höherer Ergebnissicherheit und weniger Optimierung einfacher als je zuvor, da pHrodo dunkelrot nur im späten Endosom und Lysosom fluoresziert.

Merkmale und Vorteile der pHrodo Farbstoffe für die Amin-Markierung

• Anpassung: Verwenden Sie pH-empfindliche pHrodo Farbstoffe zur Erstellung pH-empfindlicher Biokonjugate Ihrer Wahl
• Geschwindigkeit und Genauigkeit: Erzielen Sie schnellere und genauere Ergebnisse als mit jedem anderen Endozytose- oder Phagozytose-Assay, es sind keine Waschschritte oder Quencher erforderlich
• Multiplexing: Multiplexing mit grünen oder rot fluoreszierenden Markern wie GFP oder RFP mit drei verschiedenen Farboptionen
• Überlegenes Signalfenster: Minimaler Hintergrund des pHrodo dunkelroten Farbstoffs bei neutralem pH-Wert ermöglicht maximales Signal-Rausch-Verhältnis für Ergebnissicherheit
• Niedriger pKs-Wert: pHrodo dunkelroter Farbstoff eliminiert unspezifisches Signal von nicht internalisierter Ladung und resultiert in Fluoreszenz nur in späten Endosomen und Lysosomen

Der Anstieg der Fluoreszenz von pHrodo Farbstoffen bei Änderung des pH-Werts zu sauer, korreliert mit der Versauerung intrazellulärer Vesikel, wodurch diese Farbstoffe wertvolle Hilfsmittel für die Untersuchung von Endozytose oder Phagozytose und ihrer Regulierung durch Umweltfaktoren, Medikamente oder Pathogene sind. Durch die spektralen Eigenschaften von pHrodo Farbstoffen eignen sie sich auch für mehrfarbige Experimente. pHrodo iFL rote, iFL grüne und dunkelrote Farbstoffe können mit den meisten standardmäßigen rot-, grün- und dunkelrot-fluoreszierenden Filtersets nachgewiesen werden. pHrodo Farbstoffkonjugate wurden für die Verwendung in einer Vielzahl von Anwendungen validiert, einschließlich Durchflusszytometrie, Fluoreszenzmikroskopie und High-Content-Screening (HCS).

Der pHrodo dunkelrote Farbstoff hat einen niedrigeren pKa-Wert und zeigt kein Signal bei neutralen Bedingungen, sondern fluoresziert nur in sauren Umgebungen. Diese einzigartige Eigenschaft ermöglicht eine schnelle Assay-Entwicklung und Ergebnissicherheit bei der Untersuchung von Antikörperinternalisierung und endocytischen/phagozytischen Pfaden. pHrodo dunkelroter Farbstoff ermöglicht eine bessere Unterscheidung von internalisierter Ladung von außerhalb der Zelle, während pHrodo iFL rote und grüne Farbstoffe im frühen Endosom fluoreszieren.