Thermo Scientific™ PENTR™/D-TOPO™ Cloning Kit

Beschreibung

• Die pENTR™/D-TOPO™ Klonierungskits nutzen eine äußerst effiziente 5-minütige Klonierungsstrategie (TOPO™ Klonierung) für die direktionale Klonierung eines stumpfendigen PCR-Produkts in einen Vektor für das Gateway™ oder MultiSite Gateway™ System. Stumpfendige PCR-Produkte können direktional mit mehr als 90 %-iger Effizienz kloniert werden, ohne Ligase, Verfahren nach der PCR oder Restriktionsenzyme.
• Gateway™ System-tauglich: Schneller Transfer klonierter Gene zwischen mehreren Vektorsystemen
• Schnell und einfach: Von der PCR bis zum Gateway™ Entry-Klon in nur 3 Schritten und mit nur ∼5 Minuten Arbeitsaufwand
• Effizient: Über 90 % Klone mit dem richtigen Insert und in der richtigen Orientierung
• Bewährt: Zuverlässige Leistung seit mehr als einem Jahrzehnt
• Für einen Zugang zum Gateway™ System machen Sie eine PCR-Amplifikation des zu untersuchenden Gens und fügen das Produkt direkt dem mitgelieferten Topoisomerase-geladenen pENTR™/D-TOPO™ Vektor hinzu. Danach müssen Sie 5 Minuten lang inkubieren und die mitgelieferten kompetenten E. coli-Zellen transformieren. Die daraus resultierenden attL-enthaltenden Gateway™ Entry-Klone sind nun für eine effiziente Rekombination mit den gewünschten Gateway™ Zielvektoren bereit.
• pENTR™/D-TOPO™ Vektor (Abbildung 1) umfasst M13- und T7-Primer-Sequenzierungsstellen und attL-Rekombinationsstellen um die PCR-Produkt-Insertionsstelle. Die Klone können deshalb problemlos in die Gateway™ Destination-attR-Vektoren Ihrer Wahl sequenzverifiziert und rekombiniert werden. Ein Kanamycin-Resistenz-Gen und ein pUC-Ursprung dienen der Selektion und hohen Kopiepropagation in E. coli.
• Direktionale TOPO™ Klonierung erfordert keine PCR-Aufreinigung, Vektorvorbereitung oder andere zeitaufwendige DNA-Manipulationsschritte. Fügen Sie einfach Ihre PCR-Reaktion direkt dem mitgelieferten Topoisomerase-geladenen Vektor hinzu. Inkubieren Sie 5 Minuten lang, führen Sie die Transformation aus, und Sie erhalten bis zu 90 % direktional eingefügte Klone. Ein vierbasiger Überhang auf den Vektorpaaren mit einer vierbasigen Sequenz im Vorwärts-Primer in Ihrer PCR-Reaktion sorgt für Direktionalität zur Topoisomerase-Ligationsreaktion (Abbildung 2).
• Die Gateway™ Rekombinations-Klonierungstechnologie umgeht die Einschränkungen der restriktionsbasierten Klonierung. Sie haben auf diese Weise Zugang zu praktisch jedem Expressionssystem dank einer einstündigen, bis 99 % effizienten und reversiblen Gateway™ Rekombinationsreaktion. Die Möglichkeit, dieselbe DNA-Sequenz zwischen verschiedenen Vektoren ohne Anwendung von Restriktionsenzymen, Ligase, Subklonierungsschritten, Screening von zahllosen Kolonien oder Resequenzierungen zu wechseln, hilft Zeit, Kosten und Aufwand zu sparen.
• Wenn es um Klonierung geht, sind seit über zehn Jahren die TOPO™ Klonierungstechnologie und Gateway™ Rekombinationsklonierung der zuverlässige Partner Tausender von Wissenschaftlern. Schnelle, einfache und effiziente TOPO™ Klonierung und Gateway™ Rekombination