Invitrogen™ Click-iT™ Nascent RNA-Capture-Kit für die Genexpressionsanalyse

Beschreibung

Das Click-iT Kit zum Erfassen naszierender RNA nutzt unsere firmeneigene Click-iT Chemie, um neu gebildete RNAs mit hoher Effizienz und Empfindlichkeit zu erfassen. Die Click-iT Technologie ermöglicht hochauflösende Analysen der Genregulation, einhergehend mit RNA-Regulation, RNA-Stabilität, RNA-Synthese, RNA-Zerfall und -Abbau, transkriptioneller Regulierung, delta/delta C(t), nukleärer Run-on/Run-off und mehr. Den Zellen bzw. dem Gewebe wird Ethylenuridin (EU) verabreicht, ein Ribonukleotid-Homolog mit einer alkinreaktiven Gruppe. Nach der Aufnahme in die Zellen diese lysiert und die RNA isoliert. Ein Biotinazid wird “angeklickt”, woraufhin der neu synthetisierte RNA-Pool an Strepavidin-Magnetbeads gebunden wird. Die aufgefangenen RNAs werden dann amplifiziert, und die daraus resultierenden cDNAs können in verschiedenen Downstream-Applikationen eingesetzt werden. Wir haben das Produkt für Arrays validiert (hohe und niedrige Dichte): Sequenzierung auf SOLiD™ und entweder SYBR™ oder TaqMan™ basierter qPCR und qPCR-basierte Delta-CT-Analyse. Lediglich 25.000 Zellen sind für die Analyse der neu induzierten Transkripte erforderlich. Das Kit ermöglicht 40 mögliche Versuche für Markierung und Bindung, die wiederum aufgeteilt werden können in 400 separate analytische Assays. Mit einem Preis von etwa einem Dollar pro Assay ist dieses Produkt für Forscher an Hochschulen und in der Industrie perfekt geeignet. Das EU-Reagenz wird in der empfohlenen Konzentration von 200 μM von den Zellen gut toleriert. In einem Array-Screen mit mehr als 32.000 Genen konnten im Vergleich zu einem Kontrollvehikel nur bei 12 Genen äußerst geringe Veränderungen nachgewiesen werden. Ferner gab es bei einer anfänglichen Verabreichung der fünffachen Konzentration unserer Empfehlung (200 μM vs. 1,0 mM) keine Auswirkungen auf eine Reihe von Haushaltsgenen, sowie auf die Fähigkeit zu normaler Zellproliferation. Sensitivität und Zuverlässigkeit wurden in einem Low-Density-Array (TLDA™) mit apoptotischen Genen bestätigt. Der gebundene neu entstandene Pool enthielt alle zuvor charakterisierten apoptotischen (Stauroporin-induziert) Transkripte ohne erkennbare Änderungen der Sequenzinformationen.

• Weniger gefährlich

Entdeckung, nicht nur Wiedergewinnung. Die letzten Jahrzehnte in der Genomik ergaben, dass nur 2 % des menschlichen Genoms Proteine codieren. Demnach bestehen 98 % des menschlichen Genoms aus nicht-codierenden Sequenzen. Die Entdeckung der Aufgabe und der Expressionsmuster dieses enormen Reservoirs unbekannter Sequenzen wird durch diesen neuen Ansatz und die Transkriptomik dieses Jahrzehntes erheblich unterstützt.

Klick-Chemie, Aufreinigung und Analyse von DNA und RNA, Genexpressionsanalyse und Genotypisierung, Markierungschemie, Microarray-Analyse, Nachweis und Erfassung naszierender RNA mit Klick Chemie, Nukleinsäure-Markierung und Oligo-Synthese, RNA-Isolierung für Expressions-Mikroarrays, RNA-Markierung

Bestellinformation

Versandbedingung: Nasseis