Invitrogen™ SuperScript™ III System für Erststrangsynthese

Beschreibung

Mit diesem System können RNA-Ziele von 100 bp bis > 12 kb nachgewiesen werden. Die Menge des Ausgangsmaterials kann im Bereich von 1 pg bis 5 μg der Gesamt-RNA liegen. SuperScript III Reverse Transkriptase ist eine Version von M-MLV RT, die zur Reduzierung der RNase-H-Aktivität entwickelt wurde und eine höhere thermische Stabilität bietet. Das Enzym wird zur Synthetisierung von cDNA in einem Temperaturbereich von 42 °C bis 55 °C verwendet und bietet eine erhöhte Spezifität, eine höhere cDNA-Ausbeute und mehr Produkte voller Länge als andere reverse Transkriptasen. Da SuperScript III RT nicht signifikant von ribosomaler und Transfer-RNA gehemmt wird, kann sie für die Synthese von Erststrang-cDNA aus Gesamt-RNA-Präparaten verwendet werden.

• Verwendung des SuperScript III Erststrang-Systems: Die cDNA-Synthese erfolgt im ersten Schritt ausgehend von Gesamt-RNA oder Poly(A)⁺-RNA, an die Oligo(dT)-Nukleotide, Random-Primer oder genspezifische Primer gebunden haben.
• Im zweiten Schritt wird die PCR in einem separaten Röhrchen mit den für das relevante Gen spezifischen Primern durchgeführt.
• Für die PCR-Reaktion wird eine der folgenden DNA-Polymerasen empfohlen
• Platinum Taq DNA-Polymerase bietet automatische Heißstartbedingungen für erhöhte Spezifität von bis zu 4 kb
• Platinum Taq DNA-Polymerase High Fidelity bietet eine höhere Ausbeute und hohe Genauigkeit für Ziele von bis zu 15 kb
• Platinum Pfx DNA-Polymerase bietet maximale Genauigkeit für Ziele von bis zu 12 kb

• Optimale Reaktionstemperatur: 50 °C
• Ausreichend für 50 Reaktionen auf Basis eines Reaktionsvolumens von 20 μl

PCR & Real-Time PCR, reverse Transkription

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