Bac-to-Bac™ Baculovirus-Expression ist eine effiziente Methode zur Herstellung von Baculoviren für die Expression von Proteinen in Insektenzellen auf hohem Niveau. Sie beruht auf der Erzeugung rekombinanter Viren durch stellenspezifische Transposition in E. coli und nicht auf homologer Rekombination in Insektenzellen. Neu: pFastBacTOPO™ Vektoren!
Zuverlässige und schnelle Proteinexpression Das Bac-to-Bac™ Baculovirus-Expressionssystems ist schneller und einfacher als die herkömmliche Baculovirus-Expression und erhält eine hohe Proteinexpression. Bac-zu-Bac™ beruht auf der Erzeugung rekombinanter Baculoviren durch stellenspezifische Transposition in E. coli und nicht auf homologer Rekombination in Insektenzellen. Das Bac-to-Bac™ Baculovirus-Expressionssystem ist in der akademischen Literatur sehr angesehen. Etwa 100 Zitate pro Jahr seit 2000!
Herkömmliche Baculovirus-Systeme erfordern die Reinigung und Amplifikation eines viralen Überstands mit anfänglich niedrigem Titer. Dies erfordert einen zeitaufwändigen Plaque-Assay. Der Bac-to-Bac™ pFastBac™ Vektor rekombiniert jedoch mit dem übergeordneten Bacmid in kompetenten Zellen von DH10Bac™ E. coli zu einem Expressions-Bacmid. Für die schnelle Produktion eines hohen Titers von reinen, rekombinanten Baculovirus-Partikeln in der ersten Transfektion das Bacmid in Insektenzellen transfizieren. Sie sparen Wochen kostbarer Zeit. Gewinnen Sie einen reinen P2-Baculovirus-Bestand an Tag 10, ohne dass ein mühsamer Plaque-Assay erforderlich ist (siehe Abbildung 1)
Hohe Expression, einfaches Screening pFastBac™ verwendet den starken Polyhedrin-Promotor, um hohe Expressionswerte in einer Vielzahl von Insektenzelllinien wie Sf9, Sf21 und High Five™ Zellen zu erzeugen.
Neu: Bac-to-Bac™ pFastBac Vektoren sind nun auch als pFastBacTOPO™ Vektoren erhältlich. pFastBacTOPO™ Vektoren sind Blunt™ TOPO™ Vektoren und werden mit Mach1™-T1R E. coli für einfaches Klonen und die pFastBac⁄GOI-Propagation geliefert. Mit den neuen Vektoren können Sie:
Ihre Gene von Interesse (GOI) mit einem PCR-Enzym mit höchster Genauigkeit, wie Accuprime™ Pfx SuperMix, amplifizieren.
Mit TOPO™ das PCR-Produkt mit stumpfem Ende in nur 5 Minuten in den neuen Vektor klonen!
Kolonien 8 Stunden nach dem Beschichten auf selektive Nährmedien mit Ampicillin visualisieren, da Mach1™-T1R-E. coli-Zellen im Vergleich zu anderen Standard-Klonierungsstämmen eine schnellere Verdoppelung aufweisen.
Mit dem Klonierungs- oder Expressionskit Bac-to-Bac™ N-His TOPO™ können Sie ein N-terminales His-Fusionsprotein mit einem TEV-Spaltungsort herstellen, um es mit Nickel-Chelatharz (Invitrogen ProBond™ Aufreinigungssystem) zu reinigen und mithilfe der beliebten Invitrogen AcTEV™ Protease ein natives Protein zu erzeugen.
Die neuen Vektoren kombinieren die TOPO™ Klonierungstechnologie mit den hoch angesehenen Bac-to-Bac™ Baculovirus-Expressionsfunktionen, um einfaches Klonen und eine hochwertige Proteinexpression zu ermöglichen. Die pFastBacTOPO™ Vektoren werden als Klonierungs- und Expressionskits angeboten.
Bac-to-Bac N-His TOPO-Expressionskit: • Vektor-Kit für 20 TOPO-Klonierungsreaktionen, Lagerung bei -20 °C –pFastBac/NT-TOPO-Vektor mit N-terminalem His-Tag und TEV-Spaltungsort –pFastBac 1-Gus-Kontrollplasmid (Kontrollexpressionsvektor) –Weitere Kit-Reagenzien: 10x PCR, dNTP-Gemisch, Salzlösung, steriles Wasser, Kontroll-PCR-Template, Polyhedrin-Vorwärtsprimer, SV40-pA-Rückwärtsprimer • One Shot Mach1-T1R chemisch kompetente E. coli für 20 Reaktionen (20 x 50 µl), bei -80 °C lagern • MAX Efficiency DH10Bac kompetente E. coli für 20 Reaktionen (4 Kits mit je 5 x 0,1 ml), bei -80 °C lagern • ExpiFectamine Sf-Transfektionsreagenz (1 ml), bei +4 °C lagern, nicht einfrieren
