Thermo Scientific™ aminoxyTMTsixplex™ Label Reagent Set

Beschreibung

Multiplex-Charakterisierung und -Quantifizierung von Carbonyl-haltigen Biomolekülen (Kohlenhydrate, Steroide, oxidierte Proteine) mittels Massenspektrometrie (MS) mit Carbonyl-reaktiven Thermo Scientific™ aminoxyTMT (Tandem Mass Tag) Markierungsreagenzien.

Die Carbonyl-reaktiven Thermo Scientific™ aminoxyTMT™ (Tandem Mass Tag™) Markierungsreagenzien ermöglichen eine Multiplex-Charakterisierung und Quantifizierung von Carbonyl-haltigen Biomolekülen (Kohlenhydrate, Steroide, oxidierte Proteine) mittels Massenspektrometrie (MS).

Die sechs Verbindungen des aminoxyTMTsixplex™ Reagenziensets haben die gleiche (d. h. isobare) Masse und chemische Struktur (Carbonyl-reaktive Aminoxygruppe, Spacerarm und Massenreporter). Die spezifische Verteilung von 13C- und 15N-Isotopen auf beiden Seiten des HCD- oder ETD-MS/MS-Fragmentierungsortes in jedem Reagenz führt jedoch zu einer einzigartigen Reportermasse (126–131 Da) im Bereich mit geringer Masse. Dieser Satz von Reporterionen wird zur Messung der relativen Häufigkeit markierter Moleküle in einer kombinierten (Multiplexed) MS-Probe verwendet, die sechs verschiedene Behandlungsbedingungen darstellt. Für Glykobiologie-MS-Anwendungen ermöglichen die Reagenzien die quantitative Profilierung von Glykan-Isoformen und die Entdeckung von Glykan-Biomarkern. Sie bieten eine verbesserte Ionisierung markierter Glykane für eine erhöhte Empfindlichkeit und eine bessere Retention markierter Glykane durch Umkehrphasenflüssigkeitschromatographie (RPLC). Die AminoxyTMT-Reagenzien können zur Quantifizierung einer breiten Palette biologisch wichtiger Moleküle, einschließlich Kohlenhydraten, Steroiden oder oxidierter Proteine, verwendet werden.

• Quantitativ – Ermöglicht die relative Quantifizierung von Glykanen oder anderen Carbonyl-haltigen Biomolekülen aus mehreren Proben, die aus Zellen, Geweben oder biologischen Flüssigkeiten gewonnen wurden
• Stabil – Die Oximbindung und die Produkte, die durch die Markierungsreaktion gebildet werden, sind stabil und erfordern keinen zusätzlichen Reduktionsschritt
• Effizient – Erzielen einer Markierungseffizienz von mehr als 90 % in einer Stunde
• Sensitiv – 20-fache Verbesserung des Signal-Rausch-Verhältnisses im Vergleich zur MS-Analyse von nicht markiertem, nativem Glykan
• Multiplex – Kann bis zu sechs Proben gleichzeitig identifizieren und charakterisieren
• Optimiert– Verfahren und Reagenzien sind für eine ausgezeichnete Markierungseffizienz und die Rückgewinnung von Glykanen optimiert

• Markerreagenzien-Sets enthalten ausreichend aminoxyTMT-Tags für die Markierung von 6 Kontrollproben (Art.-Nr. 90400), einem Sixplex-Versuch (Art.-Nr. 90401) oder fünf Sixplex-Versuchen (Art.-Nr. 90402)

• PNGase F- (oder PNGase A)-Glykosidase- und Waters Oasis™ HLB-Säulen

• Zum Multiplexen von bis zu 6 verschiedenen Proben gleichzeitig in einem einzigen Experiment
• Relative Quantifizierung von Glykanen
• Untersuchung der strukturellen Vielfalt der Proteinglykosylierung
• Untersuchung der Glykosylierung in der Zellsignalisierung und -regulation
• Untersuchung der Krebsweiterentwicklung, Biomarkerforschung und Analyse von Biotherapeutika

Native Glykane sind aufgrund ihrer schlechten Ionisierungseffizienz durch Massenspektrometrie schwer zu untersuchen. Die Quantifizierung von Glykanen stellt eine besondere Herausforderung dar, da es keine Standards für alle natürlich vorkommenden Glykane gibt und es schwierig ist, mehrere Proben reproduzierbar zu quantifizieren. Die Aminoxygruppe hat eine bessere Reaktivität mit Carbonylen und eine bessere Stabilität des markierten Produkts im Vergleich zu Hydraziden. Die Markierung mit den AminoxyTMT-Reagenzien verbessert die Ionisierung von Glykanen und verbessert so die Empfindlichkeit und ermöglicht die relative Quantifizierung von Glykanen für bis zu sechs Proben gleichzeitig.

Das aminoxyTMTzero™ Markierungsreagenz enthält keine schweren Isotope und kann zur Bewertung des Reagenzes in verschiedenen Arbeitsabläufen verwendet werden. Die aminoxyTMTsixplex Markierungsreagenzien teilen sich eine identische Struktur mit aminoxyTMTzero Reagenz, enthalten aber im Massenreporter unterschiedliche Anzahlen von 13C- und 15N-Isotopen. Das optimale Markierungsverfahren kann in 1 Stunde abgeschlossen werden. Nach der Tag-Markierung werden die Proben vor der Massenspektrometrie-Analyse mit HILIC-Festphasenextraktion abgeschreckt und gereinigt.