Thermo Scientific™ aminoxyTMTsixplex™ Label Reagent Set

Beschreibung

Multiplex-Charakterisierung und -Quantifizierung von Carbonyl-haltigen Biomolekülen (Kohlenhydrate, Steroide, oxidierte Proteine) mittels Massenspektrometrie (MS) mit Carbonyl-reaktiven Thermo Scientific™ aminoxyTMT (Tandem Mass Tag) Markierungsreagenzien.

Die aminoxyTMTsixplex Markierungsreagenzien teilen sich eine identische Struktur, enthalten aber im Massenreporter unterschiedliche Anzahlen von 13C- und 15N-Isotopen. Das optimierte Markierungsverfahren kann in 1 Stunde abgeschlossen werden. Nach der Tag-Markierung und vor der Massenspektrometrie-Analyse werden die Proben mit HILIC-Festphasenextraktion gequencht und gereinigt. Die sechs Verbindungen des aminoxyTMTsixplex™ Reagenziensets haben die gleiche (d. h. isobare) Masse und chemische Struktur (Carbonyl-reaktive Aminoxygruppe, Spacerarm und Massenreporter). Die spezifische Verteilung von 13C- und 15N-Isotopen auf beiden Seiten des HCD- oder ETD-MS/MS-Fragmentierungsortes in jedem Reagenz führt jedoch zu einer einzigartigen Reportermasse (126–131 Da) im Bereich mit geringer Masse. Dieses Reporterionen-Set wird zur Messung der relativen Häufigkeit markierter Moleküle in einer kombinierten (gemultiplexten) MS-Probe verwendet, die sechs verschiedene Behandlungsbedingungen darstellt. Für glykobiologische MS-Anwendungen ermöglichen die Reagenzien die quantitative Profilierung von Glykan-Isoformen und die Erkennung von Glykan-Biomarkern. Sie bieten eine verbesserte Ionisierung markierter Glykane und damit eine erhöhte Empfindlichkeit und bessere Retention markierter Glykane in der Umkehrphasen-Flüssigkeitschromatographie (RPLC). Die aminoxyTMT Reagenzien können zur Quantifizierung einer breiten Palette biologisch wichtiger Moleküle, einschließlich Kohlenhydraten, Steroiden oder oxidierter Proteine, verwendet werden.

Merkmale:
• Quantitativ: Ermöglicht die relative Quantifizierung von Glykanen oder anderen Carbonyl-haltigen Biomolekülen aus mehreren Proben, die aus Zellen, Geweben oder biologischen Flüssigkeiten gewonnen wurden
• Stabil: Die Oximbindung und die Produkte, die durch die Markierungsreaktion gebildet werden, sind stabil und erfordern keinen zusätzlichen Reduktionsschritt
• Effizient: Markierungseffizienz von mehr als 90 % im Laufe einer Stunde
• Empfindlich: 20-fache Verbesserung des Signal-Rausch-Verhältnisses im Vergleich zur MS-Analyse von nicht markiertem, nativem Glykan
• Multiplex: Kann bis zu sechs Proben gleichzeitig identifizieren und charakterisieren
• Optimiert: Die Verfahren und Reagenzien sind für eine ausgezeichnete Markierungseffizienz und die Rückgewinnung von Glykanen optimiert

Lieferumfang:
• Markierungsreagenzien-Sets enthalten ausreichend aminoxyTMT-Tags für fünf sixplex-Experimente

Erforderlich:
• PNGase F- (oder PNGase A)-Glykosidase und Waters Oasis™ HLB-Säulen

Anwendungen:
• Multiplexen von bis zu 6 verschiedenen Proben gleichzeitig in einem einzigen Experiment
• Relative Quantifizierung von Glykanen
• Untersuchung der strukturellen Vielfalt der Proteinglykosylierung
• Untersuchung der Glykosylierung in der Zellsignalweiterleitung und -regulation
• Untersuchungen zum Fortschreiten von Krebserkrankungen, zu neuen Biomarkern und der Analyse von Biotherapeutika

Native Glykane sind aufgrund ihrer schlechten Ionisierungseffizienz durch Massenspektrometrie schwer zu untersuchen. Die Quantifizierung von Glykanen stellt eine besondere Herausforderung dar, da es keine Standards für alle natürlich vorkommenden Glykane gibt und es schwierig ist, mehrere Proben reproduzierbar zu quantifizieren. Die Aminoxygruppe zeigt eine bessere Reaktivität mit Carbonylen und eine bessere Stabilität des markierten Produkts im Vergleich zu Hydraziden. Die Markierung mit den aminoxyTMT Reagenzien verbessert die Ionisierung von Glykanen und damit die Empfindlichkeit und ermöglicht die gleichzeitige relative Quantifizierung von Glykanen für bis zu sechs Proben.

Diese Produkte unterliegen einer eingeschränkten Nutzungslizenz für die Marke.