Optimieren Sie Ihre Immunpräzipitation (IP) mit ChromoTek Nano-Traps

Gebrauchsfertige Affinitätskügelchen für eine schnelle und effiziente Immunpräzipitation

ChromoTek Nano-Traps sind der Maßstab in der Immunpräzipitation (IP) und ermöglichen eine schnelle und zuverlässige Einzelband-Pulldown von niedrig exprimierten Proteinen. Sie bestehen aus Nanobodies, die an Kügelchen gekoppelt sind, und sind bereit für die folgenden Anwendungen: IP, Co-IP, Co-IP/Massenspektrometrie (MS), On-Bead-Assay, ChIP/RIP-Analyse und Split-Fluoreszenzprotein-Assay.

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Vorteile der Nano-Traps

Die Vorteile des Nano-Trap-Systems umfassen:

• Keine schweren und leichten Antikörperketten
• Strenge Waschbedingungen
• Niedriger Hintergrund an Wirtszellproteinen
• Sehr effiziente Pulldown ohne Protein im Durchfluss
• Hohe Affinität zur Bindung von Proteinen, die in niedrigen Mengen exprimiert werden
• Kurze Inkubationszeit (30-60 min)
• Rekombinant exprimiert und validiert

Verfügbare Nano-Trap-Ziele

Beispiele für Nano-Trap-Ziele sind die unten aufgeführten und viele mehr:

• GFP
• V5
• DYKDDDDK
• Myc
• HA-Tag
• Ubiquitin

Bei der Verwendung von Nano-Traps ist die Menge des immunpräzipitierten Proteins von Interesse (POI) signifikant höher, und der Hintergrund ist im Vergleich zu einer IP mit einem herkömmlichen Antikörper reduziert (siehe Abbildung 1). Nano-Traps liefern reine Fraktionen des immunpräzipitierten POI ohne Kontamination durch schwere und leichte Antikörperketten.

Abbildung 1: IP eines Proteins von Interesse (POI) durch Nano-Traps (links) im Vergleich zu herkömmlichen Antikörpern, die an Protein A/G-Kügelchen gekoppelt sind (rechts), analysiert durch SDS-PAGE. M: Marker; B: gebunden.

GFP-Traps für die Immunpräzipitation

Bei der Verwendung eines GFP-Trap™ für die Pulldown von GFP-Fusionsproteinen ist die Menge des immunpräzipitierten GFP signifikant höher und der Hintergrund ist im Vergleich zu einer IP mit einem herkömmlichen anti-GFP-Antikörper, der an Protein A/G-Kügelchen gekoppelt ist, reduziert.

Keine Fragmente von schweren und leichten Antikörperketten

Schwere und leichte Antikörperketten sind kontaminierend; jedoch liefert ein GFP-Trap reine Fraktionen des immunpräzipitierten GFP-Fusionsproteins ohne solche Kontamination (siehe Abbildung 2). ChromoTek GFP-Traps wurden von Forschern über 5.000 Mal zitiert und sind die am häufigsten zitierten monoklonalen anti-GFP-Antikörper. Als solche sind sie der Goldstandard für die Immunpräzipitation von GFP-Fusionsproteinen.

Abbildung 2: IP von GFP mit einem GFP-Trap im Vergleich zu einem herkömmlichen anti-GFP-Antikörper, der an Protein A/G-Kügelchen gekoppelt ist, analysiert durch SDS-PAGE. B: gebunden; I: Eingabe; FT: Durchfluss.

Gebrauchsfertige GFP-Trap-Formate

GFP-Traps bestehen aus einem anti-GFP-Nanobody, der an verschiedene Harze konjugiert ist. Der GFP-Trap ist als Agarose-Kügelchen, magnetische Agarose-Kügelchen, magnetische Partikel oder 96-Well-Platten erhältlich. Beispiele für diese GFP-Traps und ihre Merkmale/Verwendungen sind unten aufgeführt:

• GFP-Trap Agarose: Niedrigster Hintergrund und hohe Bindungskapazität IP
• GFP-Trap Magnetische Agarose: Magnetische Trennung und hohe Bindungskapazität IP
• GFP-Trap Magnetische Partikel (M-270): Pulldown großer Proteine/Komplexe
• GFP-Trap Multiwell-Platten: Hochdurchsatzanwendungen und ELISA
• GFP-Trap Kits: Einschließlich Lysepuffer für Säugetierzellen, Wasch- und Elutionspuffer