LanthaScreen™ LanthaScreen™ TR-FRET ER beta Coactivator Assay Kit

Beschreibung

• Das LanthaScreen™ TR-FRET-Coaktivator-Assay-Kit für ER-beta bietet eine empfindliche und zuverlässige Methode für das Hochdurchsatz-Screening potenzieller Rezeptor ER-beta-Liganden als Agonisten oder Antagonisten der ligandenabhängigen Koaktivator-Rekrutierung. Das Kit verwendet eine ER-beta-Ligandenbindungsdomäne (ER-beta-LBD), die mit Glutathion-S-Transferase (GST), einem mit mit Terbium (Tb) markierten Anti-GST-Antikörper und einem mit Fluorescein markierten Coaktivator-Peptid in einem homogenen Misch-Ablese-Assay-Format markiert ist.
• Agonisten-Modus –  Zur Ausführung des LanthaScreen TR-FRET ER-beta-Koaktivator-Assays im Agonisten-Modus (zum Nachweis von Agonistenverbindungen) wird zunächst ER-beta-LBD und dann ein Gemisch aus Fluorescein-Koaktivator-Peptid und Tb-Anti-GST-Antikörper zu Liganden-Testverbindungen hinzugegeben. Nach der Inkubation der Raumtemperatur wird das TR-FRET 520:495-Emissionsverhältnis berechnet und zur Bestimmung der EC50 aus einer Dosisreaktionskurve der Verbindung verwendet. Basierend auf der Biologie der ER-Koaktivator-Peptid-Interaktion ist die EC50 dieses Liganden ein zusammengesetzter Wert, der die Ligandenmenge darstellt, die zur Bindung an den Rezeptor, zur Konformationsänderung und zur Rekrutierung des Koaktivator-Peptids erforderlich ist.
• Agonisten-Modus –  Wenn der LanthaScreen TR-FRET ER-beta-Koaktivator-Assay im Agonisten-Modus läuft (zum Nachweis von Agonistenverbindungen), wird zunächst ER-beta-LBD und dann ein Gemisch aus Agonist, Fluorescein-Koaktivator-Peptid und Tb-Anti-GST-Antikörper zu Liganden-Testverbindungen hinzugegeben. Die in diesem Modus verwendete Konzentration von Agonisten ist die EC80-Konzentration, die durch die erste Ausführung des Assays im Agonisten-Modus bestimmt wird.
• Lieferumfang:
  • 1 Röhrchen ER alpha Ligandenbindungsdomäne Rekombinantes Protein (Lagerung bei -68 bis -85 °C)
  • 1 Peptid-Röhrchen (Lagerung bei -5 bis -30 °C)
  • 2 TR-FRET Puffer-Flaschen (Lagerung bei -5 bis -30 °C)
  • 1 Tb-Anti-GST Ab-Fläschchen (Lagerung bei -5 bis -30 °C)
  • 1 DTT-Röhrchen (bei -5 bis -30 °C lagern)