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Thermo Scientific™ Active Arf1 Pull-Down and Detection Kit
Reinigen der GTPasen und Assay-Aktivierungsebenen mittels spezifischer GST-markierter Proteinbindedomänen (PBD), GSH-Agarose-Beads und Anti-GTPase-Antikörpern.
Marke: Thermo Scientific™ 16121
Beschreibung
Messung der Aktivierung kleiner GTPasen durch Isolierung über ihre spezifischen nachgeschalteten Effektoren mit den Thermo Scientific™ Pierce Pulldown- und Nachweiskits für aktive GTPasen.
Die Active GTPase Pull-Down and Detection Kits messen die Aktivierung von kleinen GTPasen durch Isolierung mittels spezifischer nachgeschalteter Effektoren. Spezielle Kits für Arf1-, Arf6-, Cdc42-, Rac1-, RalA-, Rap1-, Ras- und Rho-GTPasen sind erhältlich. Die entsprechende Bindedomäne des nachgeschalteten Effektors für jede kleine GTPase wird als GST-Fusionsprotein ausgedrückt. Bei der Immobilisierung auf Resin wird dieses Fusionsprotein dazu verwendet, die aktive (d. h. GTP-gebundene) GTPase herunterzuziehen. Der Schritt der Pull-Down-Affinitätsreinigung ist einfach und komfortabel mittels Zentrifugensäulen einer Mikrozentrifuge durchzuführen. Nach einem einfachen Waschschritt wird die gebundene GTPase wiedergewonnen, indem das GST-Fusionsprotein mittels eines SDS-PAGE-Probenbeladungspuffers aus dem Glutathionresin eluiert wird. Die gereinigte GTPase wird anschließend durch Western Blot unter Verwendung eines spezifischen Antikörpers nachgewiesen, der im Lieferumfang jedes Kits enthalten ist.
Jedes GTPase-Kit enthält GST-Fusionsproteine der speziellen Bindedomäne, GTPγS- und GDP-Aktivatoren, Glutathion-Agarose-Resin, Lyse-/Binde-/Waschpuffer, primäre Antikörper, 2 x SDS-Probenpuffer, Zentrifugensäulen und Sammelröhrchen. Jedes Kit enthält ausreichend Komponenten für 30 Pull-Down-Assays. Die Kits sind für den Western-Blot-Nachweis mit einem HRP-konjugierten Sekundärantikörper (Art.-Nr. 31460, Kaninchen; Art.-Nr. 31430, Maus) mit Thermo Scientific SuperSignal™ West Pico Chemilumineszenz-Substrat (Art.-Nr 34080) optimiert.
Besondere Merkmale:
Hohe Sensitivität und Genauigkeit – optimierte Reagenzien, spezifische Antikörper und Western-Blot-Verfahren gewährleisten genaue Kontrollen und quantitative Ergebnisse
Praktisch– keine Notwendigkeit, eigene GST-PBD- oder -RBD-Fusionsproteine zu exprimieren und zu reinigen oder teure Antikörper-basierte Immunpräzipitations-Affinitätsharze zu verwenden
Schnelligkeit– gleichzeitige Inkubation des Zelllysats mit GST-PBD oder -RBD und dem Glutathionharz direkt in einer leistungsstarken Spin-Säule für Mikrozentrifugen
Anwenderfreundlichkeit – Reagenzien und Pulldown-Bedingungen wurden für den sofortigen Erfolg optimiert, selbst für Erstbenutzer
Effizienz – die Spin-Säulen und Sammelröhrchen für Mikrozentrifugen ermöglichen eine effiziente Trennung von Flüssigkeit und Harz und verhindern so Probenverluste
Vollständig – die Kits enthalten Reagenzien für die Affinitätsreinigung sowie Kontrollen, einen kompatiblen Zelllysepuffer und spezifische Primärantikörper für den abschließenden Nachweis mittels Western Blot
GST-Fusionsproteine aktiver GTPase-Bindungsdomänen:
- Raf1-Ras-Bindungsdomäne (Raf1-RBD) bindet aktives Ras
- Pak1-p21-Bindungsdomäne (Pak1-PBD) bindet aktives Rac1 und Cdc42
- Rhotekin-Rho-Bindungsdomäne (Rhotekin-RBD) bindet aktives Rho
- RalGDS-Rap1-Bindungsdomäne (RalGDS-RBD) bindet aktives Rap1
- GGA3-Proteinbindungsdomäne (GGA3-PBD) bindet aktives Arf1 und Arf6
- Ral-bindendes Protein 1 (RalBP1) bindet aktives RalA
Enthält:
GST-Fusionsprotein einer spezifischen Bindedomäne, Glutathion-Agarose-Harz, GTPγS und GDP (100 x), Lyse-/Binde-/Waschpuffer, GTPase-spezifischer primärer Antikörper, SDS-PAGE-Probenbeladungspuffer (2 x), Spin-Säulen und Sammelröhrchen
Spezifikation
• GST-GGA3-RBD-Fusionsprotein, 1 Fläschchen • Anti-Arf1-Antikörper, 5 Einheiten, 25 µl • Glutathion-Agarose-Harz, 3 ml • GDP (100X), 50 µl • GTPyS (100x), 50 µl • SDS-Probenpuffer (2X), 1,5 ml • Lyse-/Bindungs-/Waschpuffer (1X), 100 ml • Spin-Becher, 30 Becher • Entnahmeröhrchen, 90 Röhrchen Die Lagerungsbedingungen der einzelnen Komponenten sind dem Produkthandbuch zu entnehmen. |
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Assay zur Proteinquantifizierung | |
Western Blot, Chemolumineszenz | |
Unmarkiert | |
GTPase-Substrat | |
Spin-Becher, 30 Becher, SDS-Probenpuffer (2X), 1,5 ml, Lyse-/Bindungs-/Waschpuffer (1x), 100 ml, GST-GGA3-RBD Fusionsprotein, 1 Fläschchen, Glutathion-Agarose-Harz, 3 ml, GDP (100x), 50 μl, Sammelröhrchen , 90 Röhrchen, Anti-Arf1-Antikörper, 5 Einheiten, 25 µl, GTPγS (100x), 50 μl | |
Kinasen (Mehrfach), Phosphodiesterasen, ATPasen, GTPasen, Phosphatasen |
Pierce Active Arf1 Pull-Down and Detection Kit | |
HRP | |
Zentrifugationssäule | |
Protein-basiertes Substrat | |
Pulldown | |
30 reactions |
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.