Invitrogen™ LanthaScreen™ TR-FRET PPAR gamma Coactivator Assay Kit, goat

Beschreibung

Dieses Kit enthält Ziege-Tb-Anti-GST-Antikörper; andere Kit-Komponenten sind identisch mit Kit A15126:

Das LanthaScreen™ TR-FRET PPAR-gamma-Koaktivator-Assay-Kit bietet eine empfindliche und zuverlässige Methode für das Hochdurchsatz-Screening potenzieller PPAR-gamma-Liganden als Agonisten oder Antagonisten der ligandenabhängigen Koaktivator-Rekrutierung. Das Kit verwendet einen mit Terbium (Tb) markierten Anti-GST-Antikörper, ein Fluorescein-markiertes Koaktivatorpeptid und eine Liganden-bindende Domäne für den Peroxisom-Proliferator-aktivierten Rezeptor (PPAR) gamma (PPAR-gamma-LBD), die mit Glutathion-S-Transferase (GST) markiert ist, in einem homogenen „Mix-and-Read“-Assay-Format.

Agonisten-Modus
Beim Lauf des LanthaScreen™ TR-FRET-Koaktivator-Assays für den Peroxisom-Proliferator-aktivierten Rezeptor gamma im Agonisten-Modus (zum Nachweis von Agonistenverbindungen) wird PPAR-gamma-LBD zu Liganden-Testverbindungen hinzugegeben, gefolgt von einer Mischung aus dem Fluorescein-Koaktivatorpeptid und dem Tb-Anti-GST-Antikörper. Nach einer Inkubationszeit bei Raumtemperatur wird das TR-FRET 520:495-Emissionsverhältnis berechnet und zur Bestimmung der EC50 aus einer Dosis-Reaktions-Kurve der Verbindung verwendet. Basierend auf der Biologie der PPAR-gamma-Koaktivatorpeptid-Interaktion ist die EC50 dieses Liganden ein zusammengesetzter Wert für die Menge des Liganden, die zur Bindung an den Rezeptor, für eine Konformationsänderung und die Rekrutierung des Koaktivatorpeptids erforderlich ist (Abb. 1).

Antagonisten-Modus
Bei der Ausführung des LanthaScreen™ TR-FRET-Koaktivator-Assays für den Peroxisom-Proliferator-aktivierten Rezeptor gamma im Antagonisten-Modus (zum Nachweis von Antagonistenverbindungen) wird PPAR-gamma-LBD zu Liganden-Testverbindungen hinzugegeben, gefolgt von einem Gemisch aus einem Agonisten-Fluorescein-Koaktivatorpeptid und dem Tb-markierten Anti-GST-Antikörper Die in diesem Modus angewendete Konzentration von Agonisten ist die EC-Konzentration, die durch die erste Ausführung des Assays im Agonisten-Modus bestimmt wird (Abb. 2).

Inhalt und Lagerung:
Das LanthaScreen™ TR-FRET-Koaktivator-Assay-Kit für PPARγ enthält PPAR-gamma-LBD (GST)-Protein, fluoreszierend markiertes TRAP220/DRIP-2-Koaktivatorpeptid, Tb-Anti-GST-Antikörper und mehrere Puffer. Lagerung der Komponenten wie im Assay-Protokoll angegeben (-80 °C, -20 °C oder +4 °C).