Invitrogen™ LanthaScreen™ TR-FRET PPAR alpha Coactivator Assay Kit, goat

Beschreibung

Dieses Kit enthält Ziege-Tb-Anti-GST-Antikörper; andere Kit-Komponenten sind identisch mit Kit A15133:

Das LanthaScreen™ TR-FRET PPAR-(Peroxisom-Proliferator-aktivierte Rezeptor)-alpha-Koaktivator-Assay bietet eine empfindliche und zuverlässige Methode für das Hochdurchsatz-Screening potenzieller PPAR-alpha-Liganden als Agonisten oder Antagonisten der ligandenabhängigen Koaktivatorrekrutierung. Das Kit verwendet einen mit Terbium (Tb) markierten Anti-GST-Antikörper, ein Fluorescein-markiertes Koaktivatorpeptid und eine humane rekombinante PPAR-alpha-Liganden-bindende Domäne (PPAR-alpha-LBD), die mit Glutathion-S-Transferase (GST) markiert ist, in einem homogenen „Mix-and-Read“-Assay-Format.

Agonisten-Modus:
Beim Lauf des LanthaScreen™ TR-FRET-Koaktivator-Assays für PPAR-alpha im Agonisten-Modus (zum Nachweis von Agonistenverbindungen) wird PPAR-alpha-LBD zu Liganden-Testverbindungen hinzugegeben, gefolgt von einer Mischung aus dem Fluorescein-Koaktivatorpeptid und dem Tb-markierten Anti-GST-Antikörper. Nach einer Inkubationszeit bei Raumtemperatur wird das 520 nm/495 nm-TR-FRET-Verhältnis berechnet, das zur Bestimmung der EC50 aus einer Dosisreaktionskurve der Verbindung verwendet werden kann. Basierend auf der Biologie der PPAR-alpha-Koaktivatorpeptid-Interaktion ist die EC50 dieses Liganden ein zusammengesetzter Wert für die Menge des Liganden, die für die Bindung an den Rezeptor, für eine Konformationsänderung und die Rekrutierung des Koaktivatorpeptids erforderlich ist (siehe Abb. 1).

Antagonisten-Modus:
Bei der Ausführung des LanthaScreen™ TR-FRET-Koaktivator-Assays für PPAR-alpha im Antagonisten-Modus (zum Nachweis von Antagonistenverbindungen) wird PPAR-alpha-LBD zu Liganden-Testverbindungen hinzugegeben, gefolgt von einem Gemisch aus dem Agonisten, Fluorescein-Koaktivatorpeptid und dem Tb-markierten Anti-GST-Antikörper (Abb. 2). Die in diesem Modus verwendete Konzentration von Agonisten ist die EC80-Konzentration, die durch die erste Ausführung des Assays im Agonisten-Modus bestimmt wurde.

Inhalt und Lagerung:
Das LanthaScreen™ TR-FRET-Koaktivator-Assay-Kit für PPAR-alpha enthält PPAR-alpha-LBD (GST)-Protein, fluoreszierend markiertes PGC1a-Koaktivatorpeptid, Tb-markierten Anti-GST-Antikörper und mehrere Puffer. Lagerung der Komponenten wie im Assay-Protokoll angegeben (-80 °C, -20 °C oder 4 °C).