Invitrogen™ pENTR™/TEV/D-TOPO™ Cloning Kit, with One Shot™ Mach1™-T1^R Chemically Competent E. coli

Description

• PCR-Produkte mit stumpfen Enden klonen mit einer Effizienz von über 90 % direktional in den pENTR/TEV/D-TOPO Entry-Vektor und umfassen eine TEV-Protease-abhängige Spaltstelle zur Entfernung von Tags am N-Terminus aus exprimierten Proteinen
• Rasches Hin- und Herschicken klonierter Gene zwischen mehreren Vektorsystemen
• Zuverlässige Leistung
• Für Zugang zum Gateway System eine PCR-Amplifikation des zu untersuchenden Gens durchführen und Produkt direkt an den mitgelieferten mit Topoisomerase geladenen pENTR/SD/D-TOPO Vektor anhängen. Danach 5 Minuten lang inkubieren und die mitgelieferten kompetenten E. coli-Zellen transformieren
• Die daraus resultierenden Gateway Entry attL-Klone sind nun für eine effiziente Rekombination mit ausgewählten Vektoren bereit.
• Der PENTR/TEV/D-TOPO-Vektor enthält eine Erkennungsstelle für das Tobacco Etch Virus (TEV) zur Protease-abhängigen Spaltung eines N-terminalen Tags aus rekombinantem Protein
• Der Vektor verfügt über die Primer-Sequenzierstellen M13 und T7 sowie über attL-Rekombinationsstellen an beiden Seiten der PCR-Produkt-Eingabestelle, was eine einfache Sequenzüberprüfung und Rekombination in eine Reihe von attR-haltigen Gateway Zielvektoren ermöglicht
• Ein Kanamycin-Resistenz-Gen und ein pUC-Ursprung dienen der Selektion und hohen Kopiepropagation in E. coli
• Ein vierbasiger Überhang auf den Vektorpaaren mit vierbasiger Sequenz im Vorwärtsprimer der PCR-Reaktion sorgt für Direktionalität hin zur Topoisomerase-Ligationsreaktion

Klonierung, Gateway-Klonierung