Invitrogen™ EnzChek™ Caspase-3 Activity Assay Kits

Beschreibung

Das EnzChek Caspase-3-Aktivität-Assay-Kit ermöglicht den einfachen und zuverlässigen Nachweis der Caspase-3-Aktivitäts-vermittelten Apoptose, das speziell entwickelte Substrate nutzt, die bei Spaltung durch das Caspase-3-Enzym fluoreszieren. Das EnzChek Caspase-3-Aktivität-Assay-Kit ist entweder mit dem Z-DEVD-AMC- oder Z-DEVD-R 110-Substrat erhältlich, das bei proteolytischer Spaltung durch Caspase -3/7 ein helles Fluoreszenzprodukt liefert.

Das EnzChek Caspase-3-Aktivität-Assay-Kit ermöglicht den Nachweis von Apoptose durch eine einfache und zuverlässige Methode zur Messung der Caspase-3/7-Aktivität. Mit dem Kit kann die Aktivität von Caspase-3/7 in Zellextrakten und aufgereinigten Enzympräparaten mit einem Fluorometer oder Fluoreszenz-Mikrotiterplatten-Lesegerät kontinuierlich gemessen werden.

Zu den wichtigsten Merkmalen des EnzChek Caspase-3-Aktivität-Assay-Kit gehören:
• Fluoreszenztest mit standardmäßigen Fluorescein-(FITC)-Anregungs-/Emissionseinstellungen
• Format ermöglicht die kontinuierliche Messung der Caspase-3/7-Aktivität in Zellextrakten
• Fluoreszierende und enzymatische Kontrollen enthalten

Das aus Aminomethylcoumarin (AMC) abgeleitete Substrat (Z-Asparaginsäure-Glutaminsäure-Valin-Asparaginsäure (DEVD)-AMC, das im EnzChek Caspase-3-Aktivitätskit enthalten ist, ist im UV-Bereich schwach fluoreszierend (Anregung/Emission maximal ˜330/390 nm), liefert jedoch ein helles, blau-fluoreszierendes Produkt (Anregung/Emission maximal ˜342/441 nm) nach proteolytischer Spaltung. Das Kit kann zur kontinuierlichen Messung der Aktivität von Caspase-3 und eng verwandten Proteasen in Zellextrakten und aufgereinigten Enzympräparaten mit einem Fluorometer oder Fluoreszenz-Mikrotiterplatten-Lesegerät verwendet werden.

Das im EnzChek Caspase-3 Aktivität-Assay Kit verwendete Rhodamin 110-basierte Substrat (Z-DEVD-R110) ist eine nicht-fluoreszierende Bisamidverbindung, die bei der enzymatischen Spaltung in einem zweistufigen Prozess in das fluoreszierende Monoamid und dann in das noch stärker fluoreszierende R110-Produkt umgewandelt wird. Beide Hydrolyseprodukte weisen spektrale Eigenschaften auf, die denen von Fluorescein ähnlich sind, wobei die Wellenlängen der Spitzenanregung und Emission jeweils 496 nm und 520 nm aufweisen.

Neben den Substraten enthält das EnzChek Caspase-Aktivität-Assay-Kit den reversiblen Aldehydhemmer Ac-DEVD-CHO sowie einen AMC- oder R 110-Referenzstandard. Der Ac-DEVD-CHO-Hemmer bestätigt, dass die Fluoreszenzsignale sowohl in induzierten als auch in Kontrollzellpopulationen auf die Aktivität von Caspase-3/7 Protease zurückzuführen sind. Der Referenzstandard ermöglicht die Quantifizierung der Menge von AMC oder R110, die in der Reaktion freigesetzt wird.

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