Thermo Scientific™ CloneJET™ PCR-Klonierungs-Kit mit kompetenten DH10B-Zellen

Beschreibung

• Dieses Paket enthält das CloneJET PCR Cloning Kit (20 oder 40 Reaktionen) und kompetente DH10B-Zellen, die für die Verwendung mit dem Kit optimiert sind und direkt mit dem Ligationsprodukt transformiert werden können

Beim CloneJET PCR Cloning Kit
Handelt es sich um ein leistungsstarkes System zur Positivselektion für die hocheffiziente Klonierung von PCR-Produkten, die mit einer beliebigen thermostabilen DNA-Polymerase hergestellt wurden. Beliebige DNA-Fragmente mit glatten (Blunt End) oder überhängenden Enden (Sticky-End) können kloniert werden. Das Kit eignet sich sowohl für phosphorylierte als auch nicht-phosphorylierte DNA-Fragmente. Die Ligation in den beiliegenden Vektor zur Positivselektion dauert nur fünf Minuten und führt zu einer Ausbeute von über 99 % rekombinanter Klone. Die mit einem Proofreading-Enzym hergestellten PCR-Produkte mit glattem („blunt“) Ende werden direkt in den Klonierungsvektor ligiert.

PCR-Produkte, die mit Non-Proofreading-DNA-Polymerasen (z. B. Taq-Polymerase) oder DNA Polymerase-Mischungen hergestellt wurden, werden vor der Ligation fünf Minuten lang mit dem im Kit enthaltenen Blunting-Enzym inkubiert. Kompetente DH10B-Zellen sind für die Verwendung mit diesem Kit optimiert und können direkt mit dem Ligationsprodukt transformiert werden.

Enthält den neuartigen, gebrauchsfertigen positiven Selektionsklonierungsvektor pJET1.2/blunt. Der Vektor enthält ein letales Restriktionsenzymgen, das durch Ligation eines DNA-Inserts in die Klonierungsstelle unterbrochen wird. Dementsprechend können nur Bakterienzellen mit rekombinanten Plasmiden Kolonien bilden. pJET1.2/blunt-Vektormoleküle nach Ringschluss, die kein Insert vorweisen, exprimieren ein letales Restriktionsenzym, wodurch die E. coli-Wirtszelle nach der Transformation abgetötet wird. Diese Positiv-Selektion beschleunigt drastisch das Kolonie-Screening und vermeidet zusätzliche Kosten für die Blau-Weiß-Selektion.

• Schnell: PCR-Klonierung in nur 5 min
• Höchste Effizienz: 99 % an positiven Klonen
• Kein Klonierungshintergrund: Positiver Selektionsvektor
• Vielseitig: Ideal für die Klonierung mit stumpfem oder überhängendem Ende
• Wirtschaftlich: Kein kostenintensives Blau-Weiß-Screening

Die Anwendungen umfassen:

• Klonierung von PCR-Produkten bis zu 10 kb mit glattem Ende oder 3'-dA-Schwanz
• Klonierung von DNA-Fragmenten, die mit Restriktionsenzymen erzeugt wurden
• Sequenzierung von klonierter DNA
• In vitro- und In vivo-Transkription der klonierten Inserts ab dem T7-Promotor

DH10B kompetente Zellen
hoch effiziente, chemisch kompetente E.coli-Zellen. Der DH10B-Stamm eignet sich zum Klonen von DNA, die Methylcytosin und Methyladenin enthält, und ermöglicht so eine effiziente Klonierung sowohl prokaryotischer als auch eukaryotischer genomischer DNA. Diese Zellen eignen sich ideal für den Aufbau von cDNA-Bibliotheken mit aus Plasmiden abgeleiteten Vektoren. Genotyp: F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG.

• Hohe Transformationseffizienz: > 1 x 109 cfu/μg pUC19-DNA
• Geeignet für standardmäßige und Hochdurchsatz-Klonierungsanwendungen
• Praktisch: Zwei Reaktionen pro Fläschchenpackung
• S.O.C. Wachstumsmedium ist enthalten