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Molecular Probes™ Click-iT™ EdU Pacific Blue™ Flow Cytometry Assay Kit
Click-iT™ EdU Pacific Blue™ Durchflusszytometrie-Assay-Kit
Marke: Molecular Probes™ C10418
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Beschreibung
Das Click-iT™ EdU Pacific Blue™ Durchflusszytometrie-Assay-Kit ist ein einfacher, stabilerer Assay für die Analyse der DNA-Replikation in proliferierenden Zellen im Vergleich zu herkömmlichen BrdU-Methoden. Neu synthetisierte DNA wird mit dem 405 nm-Laser des Durchflusszytometers analysiert.Auswahlhilfe für alle Click-iT™ EdU und Click-iT™ Plus EdU-Assays für die Durchflusszytometrie anzeigen.
Eine fortschrittliche Methode, die Ihnen bessere Ergebnisse liefert als BrdU
Die genaueste Methode der Proliferationsanalyse ist die direkte Messung der DNA-Synthese. Ursprünglich wurde dies durch die Einbindung radioaktiver Nukleoside wie 3H-Thymidin durchgeführt. Diese Methode wurde durch die Antikörper-basierte Erkennung des Nukleosid-Analogons Bromdesoxyuridin (BrdU) ersetzt. Click-iT™ Plus EdU Durchflusszytometrie-Assay-Kits sind eine neuartige Alternative zum BrdU-Assay. EdU (5-Ethinyl-2´-Desoxyuridin) ist ein Thymidin-Analogon, das während der aktiven DNA-Synthese in die DNA eingebaut wird. Die Erkennung beruht auf Klick-Chemie, einer Kupfer-katalysierten kovalenten Reaktion zwischen einem Azid und einem Alkin. In dieser Anwendung befindet sich das Alkin auf der Ethynylverbindung der EdU, während das Azid mit dem Farbstoff Alexa Fluor™ 488, Alexa Fluor™ 647 oder Pacific Blue™ gekoppelt ist. Standardmethoden der Durchflusszytometrie werden zur Bestimmung des prozentualen Anteils der S-Phase-Zellen in der Population verwendet (Abb. 1).
Unter milden Bedingungen ist die Verwendung mit Zellzyklus-Farbstoffen und Antikörpern möglich
Die Vorteile der Click-iT™ EdU-Markierung sind bei der Durchführung des Assays leicht erkennbar (Abb. 2). Die geringe Größe des Farbstoff-Azids ermöglicht den effizienten Nachweis des eingebauten EdU-Nukleosids unter schonenden Bedingungen, während die standardmäßige Aldehyd-basierte Fixierung und Lösungsmittelpermeabilisierung für das Click-iT™ Detektionsreagenz ausreichend sind, um Zugang zur DNA zu erhalten. Dies steht im Gegensatz zu BrdU-Assays, die eine Denaturierung der DNA (mit HCI, Wärme oder Verdauung mit DNase) zur Exposition des BrdU erfordern, so dass es mit einem anti-BrdU-Antikörper nachgewiesen werden kann. Bei Anwendung der HCl-Methode kann eine Probenverarbeitung für das BrdU-Assay zu Signalveränderungen in der Zellzyklus-Verteilung, sowie zu einer Zerstörung der Antigenerkennungsstellen führen. Im Gegensatz dazu ist das anwenderfreundliche EdU-Zellproliferationskit mit Zellzyklus-Farbstoffen kompatibel. Dieses EDU-Assay-Kit kann auch mit Antikörpern gegen Oberflächen- und intrazelluläre Marker gebündelt werden.
Schnelles und einfaches Protokoll
Das Click-iT™ EDU-Protokoll basiert auf den Aldehydfixierungs- und Lösungsmittelpermeabilisierungsschritten zur immunhistochemischen Antikörper-Markierung, doch EDU ist auch mit mit anderen Fixierungs-/Permeabilisierungswirkstoffen, einschließlich Saponin und Methanol, kompatibel. Nur fünf Arbeitsgänge sind zur Vorbereitung Ihrer Zellproliferationsdaten-Analyse erforderlich:
Genaue Ergebnisse auf kostengünstige Weise
Durch Erhöhung der Anzahl der Assays pro Kit ist Click-IT™ EdU Pacific Blue™ Durchflusszytometrie-Assay-Kit kostengünstiger als herkömmliche BrdU-Assays und ausgezeichnet für umfangreiche Experimente geeignet.
Nur für Forschungszwecke. Darf nicht für diagnostische Verfahren eingesetzt werden.
Spezifikation
| Enthält EdU (5-Ethynyl-2‘-Deoxyuridin), Pacific Blue™ Azid, wasserfreies Dimethylsulfoxid (DMSO), Click-iT™ Fixiermittel, Click-iT™ saponin-basierten Permeabilisierungs- und Waschpuffer, Kupfer(II)-Sulfat und Click-iT™ EdU-Pufferadditiv. |
|
| Durchflusszytometer | |
| Pacific Blue™ | |
| Röhrchen | |
| Click-iT™, Pacific Blue™ | |
| Raumtemperatur |
| Fluoreszent | |
| Durchflusszytometrie-Assaykit | |
| 404⁄450 | |
| Weniger gefährlich | |
| 50 Assays |
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Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
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