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Invitrogen™ BACE1 (β-Secretase) FRET Assay Kit, red
BACE1 FRET-Assay (ß-Secretase)-Kit, rot
Marke: Invitrogen™ P2985
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Beschreibung
BACE1 (β-Secretase) ist ein Schlüsselenzym, das an der Produktion von Beta-Amyloid-Peptiden (Abeta) beteiligt ist, die in extrazellulären Amyloid-Plaques der Alzheimer-Krankheit (AD) gefunden werden. In einigen Fällen kann die früh einsetzende erbliche AD auf eine schwedische Mutation im Amyloid-Vorläuferprotein (APP) zurückgeführt werden, die die Spaltung dieses Proteins durch BACE1 dramatisch erhöht. Dieser und andere genetische und pathologische Belege haben zu therapeutischen Ansätzen geführt, die sich auf die Hemmung von BACE1 und anderen APP-spaltenden Enzymen, wie Gamma-Secretase, konzentrieren. Das BACE1-Fluoreszenzresonanz-Energietransfer (FRET)-Assay-Kit liefert eine empfindliche und effiziente Methode zum Screening potenzieller BACE1-Inhibitoren. Dieses Kit nutzt aufgereinigtes Baculovirus-exprimiertes BACE1 und ein neuartiges rotes FRET-Peptidsubstrat auf Basis der schwedischen Mutante.Das BACE1 FRET-Assay-Kit bietet:
Das Prinzip des BACE1 FRET-Assays ist wie folgt: Das Peptidsubstrat wird mit zwei Fluorophoren, einem fluoreszierenden Donor (einem Rhodamin (Rh)-Derivat) und einem firmeneigenen quenchenden Akzeptor synthetisiert. Der Abstand zwischen diesen beiden Gruppen wurde so gewählt, dass bei Lichterregung die Donor(D)-Fluoreszenzenergie aufgrund eines quantenmechanischen Phänomens, das als Resonanzenergietransfer bezeichnet wird, durch den Akzeptor (A) signifikant gequencht wird (Abbildung 1). Nach Spaltung durch die Protease wird das Fluorophor von der quenchenden Gruppe getrennt und dadurch die volle Fluoreszenzausbeute des Donors wiederhergestellt. So wird ein schwach fluoreszierendes Peptidsubstrat bei enzymatischer Spaltung stark fluoreszierend; der Anstieg der Fluoreszenz hängt linear mit der Rate der Proteolyse zusammen.
Quelle von BACE1 Enzym:
Eine cDNA-Sequenz, die die Aminosäuren 1 bis 460 des menschlichen BACE1 entsprechend der Ektodomäne kodiert, wurde in rekombinanten, mit Baculovirus infizierten Insektenzellen exprimiert. Aufgereinigtes BACE1 existiert als proBACE1-Form mit einem offensichtlichen Molekulargewicht von 55 kDa und der N-terminalen Sequenz TQHGIRLPLR.
Spezifikation
| Die Komponenten des BACE1 FRET Assay-Kits sind in Tabelle 1 aufgeführt. Es ist ausreichend Reagenz für 400 kinetische Assays mit hohem Durchsatz oder Endpunkt-Assays enthalten. Das BACE1-Enzym ist auch separat erhältlich. BACE1-Enzym bei -80 °C lagern Lagern Sie BACE1-Substrat und BACE1-Produktstandard bei -20 °C. Vermeiden Sie es, diese Komponenten wiederholten Einfrier-/Auftauzyklen zu unterwerfen. Der BACE1-Assay-Puffer und die BACE1-Stopplösung können nach Erhalt aufgetaut und bei Raumtemperatur gelagert werden. | |
| FRET-Assay-Kit | |
| Beta-Sekretase-Substrat | |
| 400 x 40 µl Assays | |
| Beta-Secretase (BACE1) |
| β-Secretase-Assay | |
| Peptid-basiertes Substrat | |
| FRET | |
| Trockeneis |
Nur für Forschungszwecke. Darf nicht für diagnostische Verfahren eingesetzt werden.