Molecular Probes™ Alexa Fluor™ 555 NHS-Ester (Succinimidylester)

Beschreibung

Alexa Fluor™ 555 ist ein heller, orangefarbener Farbstoff. Der Farbstoff Alexa Fluor™ 555, der für eine stabile Signalerzeugung in der Bildgebung und Durchflusszytometrie verwendet wird, ist wasserlöslich und im Bereich von pH 4 bis pH 10 pH-unempfindlich. Zusätzlich zu reaktiven Farbstoffformulierungen bieten wir den Alexa Fluor™ 555 Farbstoff konjugiert mit einer Vielzahl von Antikörpern, Peptiden, Proteinen, Tracersubstanzen und Amplifikationssubstraten, die für die Markierung und Detektion von Zellen optimiert wurden an (Erfahren Sie mehr).

Der NHS-Ester (oder Succinimidyl-Ester) von Alexa Fluor™ 555 ist die am häufigsten verwendete Substanz, um den Farbstoff an ein Protein oder Antikörper zu konjugieren. NHS-Ester können zur Markierung der primären Amine (R-NH₂) von Proteinen, Amin-modifizierten Oligonukleotiden und weiteren aminhaltigen Molekülen verwendet werden. Das entstehende Konjugat mit Alexa Fluor™ zeigt eine hellere Fluoreszenz und höhere Photostabilität als Konjugate mit anderen Fluorophoren mit ähnlichem Spektrum.

Ausführliche Informationen zum AlexaFluor™ NHS-Ester:

Fluorophor-Markierung: Alexa Fluor™ 555 Farbstoff
Reaktive Gruppe: NHS-Ester
Reaktivität: Primäre Amine auf Proteinen und Liganden, Amin-modifizierte Oligonukleotide
Ex/Em des Konjugats: 555/572 nm
Extinktionskoeffizient: 155.000 cm-1M-1
Farbstoffe mit ähnlichem Spektrum: Tetramethylrhodamin
Molekulargewicht: ∼1.250

Typische Konjugationsreaktion
Amin-reaktive Farbstoffe können mit praktisch jedem Protein oder Peptid konjugiert werden (das bereitgestellte Protokoll ist für IgG-Antikörper optimiert). Sie können die Reaktion auf beliebige Proteinmengen skalieren, optimale Ergebnisse erzielen Sie jedoch bei einer Proteinkonzentration von mindestens 2 mg/ml. Wir empfehlen Versuche mit drei verschiedenen Markierungsgraden unter Verwendung von drei unterschiedlichen molaren Verhältnissen von reaktivem Reagenz zu Protein.

Der Alexa Fluor™ NHS-Ester ist in der Regel in hochwertigem wasserfreiem Dimethylformamid (DMF) oder Dimethylsulfoxid (DMSO) (D12345) aufgelöst. Die Reaktion erfolgt in 0,1 – 0,2 M-Natriumbicarbonat-Puffer, pH 8,3, bei Raumtemperatur für 1 Stunde. Da der pKa-Wert des Amino-Terminus niedriger ist als der der epsilon-Aminogruppe des Lysin, erreichen Sie eine bessere selektive Markierung des Amino-Terminus mit einem Puffer, der näher am neutralen pH-Wert liegt.

Konjugat-Aufreinigung
Markierte Antikörper werden in der Regel von freiem Alexa Fluor™ Farbstoff durch Einsatz einer Gel-Filtrationssäule wie Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 oder ähnlichem getrennt. Wählen Sie bei sehr großen bzw. kleinen Proteinen ein Gelfiltrationsmedium mit geeigneter molekularer Ausschlussgrenze (MWCO), oder entscheiden Sie sich für eine Reinigung per Dialyse. Wir bieten verschiedene Reinigungskits, die für unterschiedliche Mengen von Antikörperkonjugat optimiert sind:
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 0,5 – 1 mg (A33086)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 20 – 50 μg (A33087)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 50 – 100 μg (A33088)

Erfahren Sie mehr über die Protein- und Antikörpermarkierung
Wir bieten eine breite Auswahl von Molecular Probes™ Kits zur Markierung von Antikörpern und Proteinen, passend zu Ihrem Ausgangsmaterial und Ihrer Versuchsanordnung. Weitere Optionen finden Sie unter Antikörper-Markierungskits, oder nutzen Sie unser Auswahlwerkzeug für die Markierungschemie. Um mehr über unsere Markierungskits zu erfahren, lesen Sie Kits für die Markierung von Proteinen und Nukleinsäuren – Abschnitt 1.2im Handbuch von Molecular Probes™.

Bestellen Sie ein individuelles Konjugat
Sollten Sie in unserem Online-Katalog nicht das Passende finden, erstellen wir Ihnen gern ein Antikörper- oder Proteinkonjugat nach Ihren individuellen Vorgaben. Unser individualisierter Konjugationsservice arbeitet effizient und absolut vertraulich, und wir stehen ein für die Qualität unserer Arbeit. Wir sind ISO 9001:2000 zertifiziert.